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背景和目的膀胱癌是泌尿系统中最常见的肿瘤,占全部恶性肿瘤的3.2%,在我国,男性膀胱癌发病率位居全身肿瘤的第八位,女性排在第十二位以后。膀胱癌大多数来自上皮组织,其中90%以上为移行上皮肿瘤,鳞癌和腺癌各占2%～3%,非上皮性肿瘤极少见,多为肉瘤。近1/3的膀胱癌为多发性肿瘤。膀胱癌的发生是复杂、多因素、多步骤的病理变化过程,既有内在的遗传因素,又有外在的环境因素。目前大多数膀胱癌病因学研究集中在基因改变,癌基因是原癌基因的突变形式,原癌基因突变为癌基因,可使细胞无节制地分裂,导致膀胱癌发生和发展。另一方面编码调节细胞生长、DNA修复或细胞凋亡蛋白的抑癌基因失活,导致细胞生长失控。新近研究表明,肿瘤的发生发展并非由上皮或者间质某一方面决定,而是由两者相互作用所构成的肿瘤宿主界面微环境的平衡状态所决定。其中癌相关成纤维细胞（carcinoma-associated fibroblast,CAF）是上述微生态环境中最主要的宿主细胞之一,对该体系的平衡起着重要的调控作用。与正常成纤维细胞相比,CAF的表型发生了显著变化,既保留了成纤维细胞的特征如表达波形蛋白,兼具平滑肌细胞的部分特征如表达α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscleactin,α-SMA）。该类表型转化细胞的出现和聚集是肿瘤发生发展的重要标志之一。因此肿瘤间质重塑是肿瘤发生和发展过程中的一个重要改变,肿瘤间质的改变对肿瘤的诊断及预后也具有重要意义。有研究表明,在胃、结肠、直肠侵袭性癌间质中缺乏CD34成纤维细胞,而分布有大量的α-SMA肌成纤维细胞,说明CD34和α-SMA的表达有一定的内在联系。但是在膀胱癌间质中CD34和α-SMA的表达及其与Ki-67的关系尚未见相关报道,本实验采用免疫组化SP法检测在正常膀胱组织、膀胱癌组织间质中α-SMA蛋白、CD34蛋白的表达以及Ki-67的表达情况,并分析其相关性,探讨α-SMA蛋白、CD34蛋白和Ki-67在膀胱癌发展过程中的作用,为膀胱癌的临床诊断和预后提供新的方法。材料与方法收集郑州大学第一附属医院2006年5月～2007年5月68例膀胱癌的手术切除标本,其中男39例,女29例,年龄30～81岁,平均60.5岁。所有标本患者术前均未接受过放疗或者化疗。病理类型均为膀胱移行细胞癌。病理分级:Ⅰ级22例、Ⅱ级28例、Ⅲ级18例;临床分期:Tis-T1期35例、T2-T4期33例;术后随访1.5～2年,其中30例术后复发,38例术后无复发。同时取12例癌旁非癌正常组织（取自膀胱全切病例距肿瘤边缘＞5cm）作对照组。全部标本均用福尔马林固定,常规石蜡包埋,4μm厚连续切片。使用兔抗人α-SMA单克隆抗体、鼠抗人CD34单克隆抗体以及兔抗人Ki-67单克隆抗体,通过免疫组化SP法检测α-SMA蛋白、CD34蛋白和Ki-67在68例膀胱癌组织、12例正常膀胱组织间质中的表达情况。统计分析采用SPSS10.0软件对数据进行处理,按照病理分级、临床分期、有无复发分类统计,对每个指标用X2检验、Fisher’s精确概率检验或者t检验进行分析;指标之间的相关性用皮尔逊积差相关（Pearson）作相关分析,以α=0.05作为差异有统计学意义检验水准。结果1.α-SMA蛋白表达的阳性信号主要定位于膀胱癌间质细胞的胞浆。68例膀胱癌间质中有58例显示阳性表达,阳性率为85.29%（58/68）,阳性信号主要位于肌成纤维细胞和血管壁平滑肌细胞的胞浆。12例正常膀胱组织间质中有1例α-SMA蛋白阳性表达,阳性率为8.33%（1/12）,阳性信号主要位于血管壁平滑肌细胞的胞浆。α-SMA蛋白在膀胱癌间质中的表达明显高于正常膀胱组织,两者相比差异具有统计学意义（P=0.000）。α-SMA蛋白在膀胱癌不同病理分级Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级组织间质中的阳性表达率分别为:86.36%（19/22）、89.29%（25/28）、77.78%（14/18）,三组相比差异无统计学意义（P=0.553）;α-SMA蛋白在膀胱癌不同临床分期Tis-T1期、T2-T4期组织间质中的阳性表达率分别为:74.29%（26/35）、96.97%（32/33）,两组相比差异具有统计学意义（P=0.022）;α-SMA蛋白在膀胱癌复发组、无复发组组织间质中的阳性表达率分别为:96.67%（29/30）、76.32%（29/38）,两组相比差异有统计学意义（P=0.045）。2.CD34蛋白表达的阳性信号主要定位于膀胱癌间质细胞的胞浆。68例膀胱癌间质中有25例显示阳性表达,阳性率为36.76%（25/68）,阳性信号主要位于间质中小血管壁内皮细胞。12例正常膀胱组织间质中有11例CD34蛋白阳性表达,阳性率为91.67%（11/12）,阳性信号主要位于黏膜下层和血管旁的成纤维细胞胞浆中。CD34蛋白在正常膀胱组织间质中的表达明显高于膀胱癌,两者相比差异具有统计学意义（P=0.000）。CD34蛋白在膀胱癌不同病理分级Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级组织间质中的阳性表达率分别为:36.36%（8/22）、39.29%（11/28）、33.33%（6/18）,三组相比差异无统计学意义（P=0.919）;CD34蛋白在膀胱癌不同临床分期Tis-T1期、T2-T4期组织间质中的阳性表达率分别为:22.86%（8/35）、51.52%（17/33）,两组相比差异有统计学意义（P=0.014）;CD34蛋白在膀胱癌复发组、无复发组组织间质中的阳性表达率分别为:16.67%（5/30）、52.63%（20/38）,两组相比差异有统计学意义（P=0.002）。3.Ki-67染色程度判断:细胞核上有黄色至棕色颗粒着色为阳性标志。每个标本检查5个高倍视野,每个高倍视野计数100个细胞,计算Ki-67阳性细胞数与总细胞数的比值,用百分数表示即为Ki-67标记指数（labeling index,LI）。Ki-67LI＞10%为阳性病例。68例膀胱癌细胞中有37例显示阳性表达,阳性率为54.41%（37/68）。12例正常膀胱组织中有1例Ki-67阳性表达,阳性率为8.33%（1/12）。Ki-67在膀胱癌细胞中的表达明显高于正常膀胱组织,两者相比差异具有统计学意义（P=0.003）。Ki-67在膀胱癌不同病理分级Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级中的阳性表达率分别为:45.45%（10/22）、46.43%（13/28）、77.78%（14/18）,三组相比差异无统计学意义（P=0.067）;Ki-67在膀胱癌不同临床分期Tis-T1期、T2-T4期中的阳性表达率分别为:42.86%（15/35）、66.67%（22/33）,两组相比差异有统计学意义（P=0.049）;Ki-67在膀胱癌复发组、无复发组中的阳性表达率分别为:76.67%（23/30）、36.84%（14/38）,两组相比差异有统计学意义（P=0.001）。4.在膀胱癌组织间质中,58例α-SMA蛋白阳性表达中,有41例CD34蛋白呈阴性表达;10例α-SMA蛋白阴性表达中,有8例CD34蛋白呈阳性表达;共同阳性表达有17例,共同阴性表达的有2例。用皮尔逊积差相关（Pearson）作相关分析显示:α-SMA蛋白与CD34蛋白在膀胱癌组织间质中的表达呈负相关（P=0.007,r=-0.372）。5.在膀胱癌组织中,间质成纤维细胞α-SMA蛋白表达阳性的膀胱癌细胞Ki-67标记指数为（37.6±17.5）%,与间质成纤维细胞α-SMA蛋白表达阴性的膀胱癌细胞Ki-67标记指数（32.8±18.3）%相比较,两者差异无显著性（P＞0.05）。6.在膀胱癌组织中,间质细胞CD34蛋白表达阳性的膀胱癌细胞Ki-67标记指数为（41.5±19.4）%,与间质细胞CD34蛋白表达阴性的膀胱癌细胞Ki-67标记指数（25.8±15.2）%相比较,两者差异具有显著性（P＜0.05）。结论1.膀胱癌组织间质中,α-SMA蛋白呈高表达,CD34蛋白呈低表达;α-SMA蛋白与CD34蛋白的表达呈负相关性,可以作为评价膀胱癌浸润程度和预后的指标。2.α-SMA蛋白表达与肿瘤的增殖无相关性;CD34蛋白表达与肿瘤的增殖有相关性。