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目的通过对RA动物模型大鼠胶原诱导性关节炎(CIA)的实验研究,探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)在CIA大鼠脾脏、胸腺和关节等脏器的迁移、定植和分布,为临床应用间充质干细胞移植治疗类风湿关节炎等自身免疫性疾病提供实验依据和理论基础。方法1.共聚焦荧光显微镜检测BMSCs移植在CIA大鼠体内的分布:从Wistar大鼠骨髓腔分离大鼠MSCs,体外培养、纯化及传代,荧光染料PKH26和Brdu标记BMSCs后,经大鼠尾静脉移植入体内,分别在不同时期(早、晚期)和不同时点(3、11、30和42d)后处死大鼠,取脾脏、胸腺及关节组织,脾脏和胸腺组织制作冰冻切片,关节组织经脱钙后制作石蜡切片。通过激光共聚焦荧光显微镜来观测PKH26阳性细胞(即BMSCs)的分布情况。2. HE染色观察关节组织的病理结构变化:对关节组织的石蜡切片做HE染色,通过观测正常阴性对照组、CIA大鼠未移植BMSCs对照组和CIA大鼠移植BMSCs治疗组(即早期组和晚期组)各组大鼠关节的病理结构变化,从病理角度说明BMSCs对CIA大鼠的治疗作用。3.免疫组化方法检测BMSCs移植在CIA大鼠关节中的分布:在不同时期(早、晚期)和不同时点(3、11、30和42d)留取大鼠踝关节,制作石蜡切片。用免疫组化方法检测经Brdu标记的BMSCs在关节中的分布。结果1.共聚焦荧光显微镜检测BMSCs移植在CIA大鼠体内的分布:在激光共聚焦荧光显微镜下,早晚期组脾脏、胸腺在3d和11d可见多数BMSCs,呈团状或散在分布,并以早期组居多;30d较多,42d减少。关节组织BMSCs分布较少,可能与关节组织制作石蜡切片经酒精脱蜡,PKH26荧光淬灭有关。下一步免疫组化实验进一步论证。2. HE染色观察关节组织的病理结构变化:CIA模型组大鼠的滑膜层次增多,排列紊乱,大量炎性细胞浸润,软骨、骨组织严重侵蚀;BMSCs治疗组滑膜炎症、软骨及骨组织侵蚀明显改善,基本无炎性细胞浸润。3.免疫组化法检测BMSCs移植在CIA大鼠关节中的分布:免疫组化实验证明,经Brdu标记的BMSCs分布于早、晚期组的关节组织中。结论1.异基因BMSCs经尾静脉植入CIA大鼠后具有向周围组织(脾脏、胸腺和关节)迁移的能力。2.异基因BMSCs移植可以改善CIA大鼠的关节损害程度。