【摘 要】
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目的构建载有microRNA-21的重组真核表达质粒,转入人肺癌细胞,观察microRNA-21对抑癌基因PTEN的调控作用。方法人工合成microRNA-21序列,插入到质粒pGenesil-1中,构建真核表
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目的构建载有microRNA-21的重组真核表达质粒,转入人肺癌细胞,观察microRNA-21对抑癌基因PTEN的调控作用。方法人工合成microRNA-21序列,插入到质粒pGenesil-1中,构建真核表达载体,将重组的真核表达质粒、空质粒、空白对照分别用脂质体转染法稳定转染人肺癌细胞,用RT-PCR检测PTEN基因mRNA在转染前后的表达水平变化,用Western blot检测PTEN蛋白在转染前后的表达水平变化。结果经酶切和测序鉴定,重组真核表达载体构建成功;RT-PCR检测显示,空白对照组的PTEN基因mRNA拷贝数/GAPDH拷贝数为0.2187±0.022,转染空质粒组为0.2200±0.027,而转染重组质粒后,实验组PTEN基因的mRNA拷贝数/GAPDH拷贝数为0.2233±0.018,经统计分析,实验组细胞PTEN基因mRNA水平与空质粒组及空白对照组无显著性差异(P>0.05);Western blot检测显示,空白对照组PTEN蛋白拷贝数/β-actin蛋白拷贝数蛋白水平为0.2433±0.0425,转染空质粒组为0.2640±0.0275,而转染重组质粒后,实验组为0.1067±0.0421,有显著性差异(P<0.05)。结论转染重组质粒后,PTEN基因的mRNA表达水平没有变化,而蛋白表达水平有变化,推测microRNA-21可能主要在翻译水平调控PTEN基因的表达。
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