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本研究分为二部分： 第一部分:三七总皂苷减轻HHPH的临床研究 目的:研究MAPKs信号通路在慢性阻塞性肺疾病(COPD)中HHPH发生发展中的作用;探讨三七总皂苷防治HHPH的作用及与MAPKs信号通路的关系。 方法: 1、COPD病例(n=22)，随机分为常规治疗组(n=11)，和三七总皂苷治疗组(n=11)，随机抽取无肺疾患正常人作为对照组(n=11)。常规治疗组予支气管扩张剂、抗生素及吸入糖皮质激素，三七总皂苷治疗组在常规治疗基础上加用血塞通针0.45 ivgtt qd，共治疗2周，正常对照组不予任何治疗措施。 2、分别于治疗前后测定肺功能及血气分析指标一秒钟用力呼气容积占预计值百分比[FEVI(％Per)]、动脉血二氧化碳分压(PaCO2)、动脉血氧分压(PaO2)、肺动脉压力(PAP)，并抽取动脉血2ml，按一次检测量分装，冻存于-20℃，使用ELISA法检测血浆磷酸化Erk1/2及磷酸化P38MAPK蛋白浓度。 3、对各组治疗前后FEVI、PaCO2、PaO2改变和常规治疗组、三七总皂苷治疗组治疗前后PAP、p-Erk1/2及p-P38浓度变化进行统计分析。 结果: 1、肺功能及血气分析结果:三七总皂苷组经治疗后病情好转，主要表现为PaCO2下降(52.55±10.8，P＜0.05)，PaO2升高(58.18±8.17，P＜0.05)，PAP降低(44.64±12.78，P＜0.05);常规组部分指标有所缓解，表现为PaCO2降低(51.73±11.9，P＜0.05)，PaO2升高(57.27±6.53，P＜0.05)，PAP改变不明显。两组临床治疗效果比较有统计学差异（P＜0.05）。 2、ELISA结果:三七总皂苷组综合治疗后血浆p-ERK、p-P38表达降低（P均＜0.01）），常规组无明显差异(P＞0.05)，两组比较有统计学差异(P均＜0.05）。 结论: 1.MAPKs信号通路可能介导COPD患者低氧高二氧化碳性肺动脉高压的形成; 2.三七总皂苷可能通过抑制P38MAPK、ERK1/2通路缓解COPD患者低氧高二氧化碳性肺动脉高压。 第二部分:三七皂苷单体R1、Rb1、Rg1减轻HHPV的实验研究 目的:探讨三七皂苷单体R1、Rb1、Rg1减轻HHPV的作用及与MAPKs信号通路的关系。 方法:原代培养雄性SD大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)，采用小鼠抗大鼠-S M-actin免疫组织化学SABC法染色进行细胞鉴定，取第2至5代细胞，用无血清培养基饥饿24小时同步化后于低氧高二氧化碳(PO250-60mmHg，PCO255-60 mmHg)条件下继续培养，并分别用低剂量(8mg/L)、中剂量(40mg/L)和高剂量(100mg/L) R1、Rb1和Rg1单独孵育细胞24小时之后收集细胞，分别采用免疫印迹法测定Erk1/2、p38MAPK磷酸化蛋白表达，半定量逆转录-聚合酶链反应技术检测Erk1、Erk2、p38MAPK基因水平的表达。 结果: 1.Western blot结果: ①不同浓度R1干预组及对照组:p-ERK蛋白在N组表达弱，H、HD、R、RM、RH组增强，差异有统计学意义(P＜0.01);较之H组，RL、RM、RH组均减弱，差异有统计学意义(P＜0.01);呈浓度梯度性，RL组＜RM组＜RH组，RL、RM、RH组间差异均有统计学意义(P＜0.05)。p-p38蛋白在N组表达弱，H、HD、R、RM、RH组增强，差异有统计学意义(P＜0.01);较之H组，RL、RM、RH组均减弱，差异有统计学意义(P＜0.01);呈浓度依赖性，RH组＜RM组＜RL组，差异无统计学意义(P＞0.05)。 ②不同浓度Rb1干预组及对照组:p-ERK蛋白在N组表达弱，H、RbL、RbM、RbH组上调(P＜0.01)，较之H组，RbL、RbM、RbH组表达减弱，差异有统计学意义(P＜0.01);呈浓度依赖性，RH组＜RM组＜RL组，RbH组和RbL组之间差异有统计学意义(P＜0.05)，RbH、RbL组均与RbM组无统计学差异(P＞0.05)。p-p38表达在N组表达弱，H、RbL、RbM、RbH组上调;较之H组，RbL、RbM、RbH组表达减弱，差异有统计学意义(P＜0.01);呈浓度差异性，RM组＜RH组＜RL组; RbM组和RbL组间差异有统计学意义(P＜0.01)，RbM、 RbL组均与RbH之间无统计学差异(P＞0.05)。 ③不同浓度Rg1干预组及对照组: p-ERK蛋白在N组表达不明显，H、H D、RgL、 RgM、RgH组增强，差异有统计学意义(P＜0.01);较之H组，RgL、RgM、RgH组p-ERK表达减弱，差异有统计学意义（P＜0.01）;呈浓度差异性，RM组＜RH组＜RL组;RbM组和RbL之间差异有统计学意义(P＜0.05)，RbM、RbL组均与RbH组无统计学差异(P＞0.05);p-p38蛋白在N组表达不明显，H、HD、 RgL、RgM、RgH组增强，差异有统计学意义(P＜0.01);较之H组，RgL、RgM、RgH组减弱，差异有统计学意义(P＜0.01);呈浓度依赖性，RH组＜RM组＜RL组，RgH组、RgM组均与RgL组存在统计学差异(P＜0.01) RgH组和RgM组之间差异无统计学意义(P＞0.05)。 2、RT-PCR结果: ①R1干预组:ERK1mRNA表达在N组弱，H、HD、RM上调（P＜0.01）和RH组上调（P＜0.05），RL组上调不明显(P＞0.05);较之H组，RL、RM、RH组降低，但仍高于N组水平，差异有统计学意义(P值分别＜0.01、＜0.05);呈浓度梯度性，RL组＜RM组＜RH组;各浓度组之间差异无统计学意义(P＞0.05)。ERK2mRNA表达在N组不明显，H、HD、RL、RM、RH组上调(P＜0.01）;较之H组，RL、RM、RH组ERK2mRNA表达均显著降低，但仍高于N组水平，差异有统计学意义(P＜0.01);呈浓度梯度性，RL组＜RM组＜RH组，RL组和RH之间差异有统计学意义(P＜0.01)，二者与RM组均无统计学差异(P＞0.05）。p38mRNA表达在N组较弱，H、HD、RL、RM、RH组升高(P＜0.01);较之H、HD组，R1各浓度组p38mRNA表达均明显减弱，差异有统计学意义(P＜0.01);呈浓度依赖性，RH组＜RM组＜RL组，RH组RL组和之间差异有统计学意义(P＜0.05），RH、RL组均与RM组无统计学差异（P＞0.05）。 ②Rb1干预组:ERK1 mRNAN组弱表达，H、RbL组上调（P＜0.05），RM、RbH组上调不明显（P＞0.05）;较之H组，Rb1各浓度组ERK1 mRNA表达均显著降低，但仍高于N组水平，差异有统计学意义(P＜0.01)。各浓度组之间ERK1 mRNA表达呈浓度依赖性，RbH组＜RbM组＜RbL组，各浓度组之间差异无统计学意义(P＞0.05）。N组细胞ERK2mRNA表达较弱，H组、RbL组、RbM组、RbH组表达均明显上调(P＜0.01）;较之H组、HD组，Rb1各浓度组ERK2 mRNA表达均显著降低，差异有统计学意义(P＜0.01)。各浓度组之间ERK2 mRNA表达呈浓度依赖性，RbH组＜ RbM组＜RbL组，RbH和RbM两组均与RbL组存在统计学差异(P分别＜0.01和＜0.05），RbH和RbM组之间无统计学差异(P＞0.05)。p38MAPKmRNA在N组表达较弱，H组、RbL组、RbH组表达均显著上调(P＜0.01)，RbM组上调不明显(P＞0.05);较之H组、HD组，Rb1各浓度组p38MAPKmRNA表达均明显下调，但仍高于N组水平，差异有统计学意义（P＜0.01）。各浓度组之间p38MAPKmRNA表达存在差异，RbM组＜RbH组＜ RbL组，差异均无统计学意义(P＞0.05)。 ③Rg1干预组:N组ERK1mRNA弱表达，H组、HD组、RgL组表达均明显上调(P＜0.01)，RgM、RgH组上调不明显(P＞0.05);较之H组、HD组，RgL、RgM、RgH组降低，但仍高于N组水平，差异有统计学意义(P＜0.01);有变化趋势，RgM组＜RgH组＜RgL组，差异无统计学意义(P＞0.05）。ERK2mRNAN组表达较弱，H、HD、 RgL、RgM、RgH组增强(P＜0.01）;较之H、HD组，RgL、RgM、RgH组降低，差异有统计学意义(P＜0.01);RgM组＜RgH组＜RgL组，RgM组和RgL之间差异有统计学意义(P＜0.05），RgM、 RgL均与RgH组之间均无统计学差异(P＞0.05)。p38MAPKmRNA在N组表达弱阳性，H、HD、 RgL、RgM组上调(P＜0.01），RgH组上调不明显(P＞0.05）;与H、HD组比较，RgL、RgM、RgH组减弱，但仍高于N组水平，差异有统计学意义(P＜0.01);呈浓度依赖性，RgH组＜RgM组＜RgL组，RgL、 RgH组之间差异有统计学意义(P＜0.05)。 结论: 1、MAPKs信号通路可能介导大鼠低氧高二氧化碳性肺动脉收缩; 2、三七皂苷单体R1、Rb1和Rg1均可能通过抑制ERK1/2、P38MAPKs通路减轻低氧高二氧化碳性肺动脉收缩。