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肝癌主要的治疗方法包括手术治疗、经肝动脉化疗栓塞术、物理治疗、药物治疗等。近20年来，我国肝细胞性肝癌的治疗取得了长足的进步，但治疗的疗效还远不理想。影响因素很多，除治疗方法的选择外，与肿瘤的生物学特性、各种细胞调控因子的影响密切相关。从更深层次阐明肝癌发生、发展、治疗的机理，探索新的综合治疗模式，才能进一步提高肝癌治疗的效果。随着分子生物学的飞速发展，人类对肝癌的发生、发展、转移的分子机制有了更深的认识。目前的基础研究主要集中在基因治疗、抗血管生成治疗、抗耐药治疗、免疫治疗、促肿瘤细胞凋亡等方面。
细胞凋亡是机体的重要生理过程，对维持组织正常形态结构和稳定机体内环境有重要作用。异常细胞凋亡的抑制不仅在恶性肿瘤的形成中有重要作用，而且参与恶性肿瘤进展、转移。诱导肿瘤细胞凋亡已成为目前治疗恶性肿瘤的一项重要生物学策略。
细菌可以引起肿瘤萎缩早已为我们所了解。细菌在肿瘤治疗中的应用包括：以细菌作为化学治疗的增敏剂；作为抗肿瘤药物的载体；作为基因治疗的载体。感染性微生物能够引起肿瘤缩小是因为它可以激活机体的免疫系统而起到抗肿瘤作用。但近期的研究发现，当免疫缺陷的荷瘤小鼠感染某些细菌时，也可看到肿瘤的缩小，提示引起肿瘤缩小的可能还有其它的因素。由于活细菌或减毒株的应用可引起明显的毒副作用，因此，科研人员正在筛选出一些具有抗肿瘤作用的细菌蛋白质或细菌组分。绿脓杆菌甘露糖敏感血凝菌毛株菌苗(pseudomonasaeruginosa with mannose-sensitive hemagglutining cilia，PA-MSHC)是富含MSHC菌毛的绿脓杆菌灭活制剂，临床上能够有效地调节机体免疫，临床上可作为肿瘤治疗的辅剂，但其是否有直接引起肿瘤细胞凋亡的作用及引起凋亡的机理尚少见报道。
目的：本研究用PA-MSHC作用于人肝癌细胞HepG-2，通过细胞增殖抑制实验观察其是否有直接抑制人HepG-2细胞生长的作用；同时应用形态学、病理学方法来观察PA-MSHC是否有诱导该细胞凋亡的作用；通过western-blot法检测凋亡相关蛋白的表达，阐明PA-MSHC引起人HepG-2细胞凋亡的机制；最后观察PA-MSHC在裸鼠瘤体及瘤周注射后的抑瘤效果。以期为肝癌的治疗提供实验依据和一种有益的思路。
方法：1．MTT法检测细胞生长抑制情况：取对数生长期的HepG-2细胞，以1×10<4>个接种于96孔板，在培养箱中培养24h后，分别以1×10<8>个/100μL， 5×10<7>个100μL，2.5×10<7>个/100μL，1.25×10<7>个/100μL，6.25×0<6>个/100μLPA-MSHC菌苗作用12h，24h，48h，加入MTT(5g/L)，4h后加入二甲亚砜(DMGO)，10分钟后酶标仪上测定490nm的吸光度值(A490)，计算细胞抑制率。2．荧光标记法检测细胞凋亡情况：HepG-2细胞以5×10<4>个细胞/孔接种与24孔板，不同浓度PA-MSHC作用24h，用荧光标记法测细胞凋亡率。3．原位末端标记(TUNEL)检测细胞凋亡情况：将HepG-2细胞以5×10<5>个细胞/孔接种于预置载玻片的6孔板，以不同浓度PA-MSHC作用24h后取出载玻片，4％福尔马林固定60分钟、TUNEL法显色。显微镜下观察，计算凋亡率。4．细胞形态学观察：收集PA-MSHC作用12h，24h，48h后的HeDG-2细胞，荧光倒置显微镜下观察。戊二醛和锇酸固定，染色，H-600A透射电镜观察细胞超微结构并照相。5．Western Blot检测bcl-2，bax，Fas，FasL，caspase-3，caspase-8，caspase-9蛋白表达：收集处理24 h细胞提取细胞中总蛋白，测定出样品的蛋白质含量，然后将蛋白质在不连续聚丙烯酰胺凝胶中电泳，转膜，染色，观察结果。6．裸鼠模型抑瘤率的观察：移植瘤模型建立后分为3组：PBS对照组，低剂量PA-MSHC治疗组，高剂量PA-MSHC治疗组。瘤体及瘤周注射治疗在皮下接种2周后进行，每次给药前进行瘤体测量。电镜观察给药后肿瘤组织变化特点。
结果：1．MTT法检测HeDG-2细胞抑制率：肿瘤细胞的抑制率与药物浓度和作用时间成正比，实验组与对照组有明显差异(P<0.01)。2．荧光标记法检测细胞凋亡：高、低浓度实验组和对照组凋亡率分别为：19.1％，7.7％和，0.7％。各实验组与对照组差别显著(P<0.01)。3．TUNEL检测凋亡：高、中、低浓度实验组和对照组凋亡率分别为19.0％，7.59％和0.96％，各实验组和对照组之间有明显差异(P<0.01)。4．细胞形态学观察：光镜观察见实验组细胞生长明显受抑制。电镜观察可见经PA-MSHC作用后的HeDG2细胞呈现典型的凋亡表现。5．WesternBlot法检测蛋白表达：PA-MSHC作用后可引起Bax、Fas、Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达上调，Bcl-2和FasL蛋白表达下调。6．裸鼠模型抑瘤率的观察：高剂量组的抑瘤率明显高于对照组，没有明显的毒副作用。
结论：1．绿脓杆菌制剂PA-MSHC在体外可明显抑制HepG-2细胞的生长。2．诱导肿瘤细胞凋亡是PA-MSHC对抗肿瘤的重要机制之一。3．PA-MSHC可通过死亡受体和线粒体途径诱导肿瘤细胞凋亡。4．PA-MSHC可降低人肝癌HepG-2细胞裸鼠皮下移植瘤的体积，具有良好的抑瘤作用。