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目的: 通过体内实验,验证加味牛蒡子汤及三七总皂苷调控淋巴回流功能减轻类风湿性关节炎炎症损害的作用。通过体外实验,进一步探索三七总皂苷调控淋巴管生成的机制。 方法: 1.给予公认的类风湿性关节炎模型TNF-Tg小鼠加味牛蒡子汤灌胃治疗,检测淋巴回流功能、踝及跖趾关节结构变化、炎症浸润和踝关节炎症状的变化。 2.利用Tg(fli1:egfp;gata1:dsred)斑马鱼,筛选加味牛蒡子汤中有效组分对斑马鱼淋巴管生成的影响;选择对淋巴管生成有促进作用的有效组分三七总皂苷灌胃治疗TNF-Tg小鼠,检测淋巴回流功能、踝及跖趾关节结构、踝关节炎症浸润和关节炎症状的变化。 3.用不同浓度(10μM,50μM,100μM)三七总皂苷干预大鼠淋巴管内皮细胞,检测细胞增殖、迁移、成管的功能以及淋巴管内皮细胞VEGF-C mRNA和蛋白的表达及其上游信号分子ERK总蛋白和磷酸化蛋白水平。 结果: 1.加味牛蒡子汤能够减轻TNF-Tg小鼠踝关节水肿、抑制跖趾关节畸形、踝关节炎症浸润和结构破坏,保护踝关节活动度,并能够修复淋巴系统回流的功能。 2.三七总皂苷明显地促进斑马鱼淋巴管增生;对TNF-Tg小鼠,有关节消肿、抑制关节畸形、保护关节活动度,减轻关节炎症浸润和骨质破坏,保护淋巴回流功能的作用。 3.三七总皂苷呈剂量依赖性上调VEGF-C的表达,并能促进ERK蛋白磷酸化,促进淋巴管内皮细胞的增殖、迁移和成管功能。 结论: 1.加味牛蒡子汤能够促进淋巴系统回流,并明显减轻RA的炎症症状及关节损伤。 2.三七总皂苷有促进淋巴系统发育,修复淋巴系统发育缺陷,治疗类风湿性关节炎,保护淋巴回流功能的作用。 3.三七总皂苷具有促进大鼠淋巴管内皮细胞的增殖、迁移、成管的作用,可能是通过激活ERK磷酸化上调VEGF-C的表达而发挥作用。