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本研究内容主要分为两部分，第一部分探讨E2F家族成员E2F8在肝癌发生发展中的作用。肿瘤细胞生长失调是调控细胞周期，凋亡及生长微环境相关基因异常所导致。转录因子E2F家族与人类肿瘤细胞生长密切相关，但其成员E2F8与肿瘤关系尚不明确，因此我们探讨了E2F8在肝癌发生发展的作用，从而进一步来理解E2F家族与人类肿瘤的关系。通过RT-PCR，荧光定量PCR及组织芯片技术检测了E2F8在肝癌组织或细胞中的表达情况；DNA亚硫酸盐测序技术分析了肝癌组织中E2F8启动子区域的甲基化水平；构建E2F8的真核表达载体和特异性干扰E2F8表达载体系统，利用细胞生长曲线，平板克隆形成及小鼠成瘤实验，分析了过表达或干扰E2F8表达对细胞生长的影响；流式细胞仪检测了E2F8表达上调或下调时细胞周期和BrdU掺入的改变；细胞同步化后释放，分析了E2F8对细胞周期的具体影响；定量PCR和免疫印迹检测了E2F8对相关基因表达的影响，并通过染色质免疫共沉淀技术研究了E2F8与eyclin D1调控元件DNA的相互作用。研究结果表明，E2F8在65％～75％肝癌病例中表达上调，并且与其启动子DNA区域的低甲基化呈现一定的相关性；E2F8过表达能够促进肝癌细胞系PLC/PRF/5在体内外的生长，E2F8表达受干扰后，肝癌细胞生长受到抑制。E2F8影响细胞周期，表现为E2F8过表达加速PLC/PRF/5细胞周期G1-S转化及BrdU掺入增加；E2F8低表达则导致细胞G1期阻滞，S期进入减慢，BrdU掺入减少；E2F8通过其DNA结合结构域与cyclin D1启动子的结合来调控cyclin D1的表达。我们的研究结果发现了E2F8在肝癌中高表达，并且通过调控cyclin D1影响细胞周期从而促进和维持着肝癌细胞株的生长。E2F8在肝癌发生发展中发挥着重要的作用，可作为肝癌治疗的靶基因。
第二部分研究主要针对X染色体上肿瘤-睾丸基因或类似肿瘤睾丸基因(统称候选肿瘤睾丸基因)对肝癌细胞生长的影响进行了研究。肿瘤睾丸基因是一类在肿瘤中异常表达但正常情况下仅在睾丸中表达或在其它组织中微量表达的基因。肿瘤睾丸基因在肿瘤发生发展中起着重要的作用，为了鉴定影响肝癌细胞生长的重要基因和寻找肝癌潜在的治疗靶点，我们选定了位于人类X染色体上的候选肿瘤睾丸基因进行研究。通过检索已知的肿瘤睾丸基因数据库，分析大规模平行测序技术(MPSS)数据、ESTs数据及手动查阅文献，选择了X染色体上的候选肿瘤睾丸基因；针对这些候选肿瘤睾丸基因设计了特异性引物和siRNAs文库，利用RT-PCR技术评价了这些候选肿瘤睾丸基因在肝癌细胞中的表达情况；利用siRNAs转染细胞介导的RNA干扰和CCK-8测定细胞活性的方法，建立了大规模siRNAs筛选影响肝癌细胞生长基因的技术体系。定量PCR验证siRNAs对细胞的RNAi效应，生长曲线分析siRNAs对细胞生长的影响；构建了pSUPER及腺病毒介导的RNAi载体系统，克隆形成实验，小鼠成瘤实验分析基因对肝癌细胞体内外生长的影响。我们选定了167个X染色体上的候选肿瘤睾丸基因，发现它们集聚于Focus，PLC/PRF/5两株肝癌细胞中表达。RNAi筛选候选肿瘤睾丸基因对肝癌细胞Focus，PLC/PRF/5生长活性的影响，统计分析筛选数据后发现18个能够影响细胞活性的靶基因，包括已知肿瘤睾丸基因家族成员、转录因子、磷酸酶、白介素家族成员等。RNA干扰靶基因(CXorf41，DUSP21，MAGEA9，ZCHHC13，CSAG1)能够抑制肝癌细胞的克隆形成能力。我们对这些候选肿瘤-睾丸(CT)基因的筛选鉴定到了影响肝癌细胞生长的重要基因，这些候选肿瘤-睾丸基因可能成为肝癌治疗的靶点。