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目的:FXYD3，又叫Mat-8(mammary tumour8kD)，是FXYD家族的一个新成员，具有离子通道或离子通道调节器的作用，参与细胞功能和微环境的调节。研究发现FXYD3在肿瘤组织中的表达高低因肿瘤组织的类型不同而不同，在有的肿瘤组织中表达上调，充当癌基因的角色，而在另一些肿瘤中则具有抑癌基因的作用。
PINCH(Particularly interesting new cysteine-histidine rich protein,PINCH)是新近发现的一个含有5个LIM结构域的黏着斑蛋白，参与细胞的许多基础功能，包括细胞的粘附、迁移及生存等。研究表明PINCH蛋白主要表达在肿瘤相关间质细胞上，在许多肿瘤中表达上调，并与淋巴结的转移有关，是一个提示预后的肿瘤间质标记物。
P33ING1b是一个新的肿瘤抑制基因，它的功能丧失或低表达参与许多肿瘤的发生、发展。现代肿瘤分子生物学研究表明，肿瘤的发生、发展，是一个多基因、多因素相互作用的结果，包括癌基因的激活、抑癌基因的失活、微环境的改变以及肿瘤细胞与间质细胞之间的相互作用等等。这些因素的改变及其相互作用对肿瘤的发生、发展起着十分重要的作用。P33ING1b是一个肿瘤抑制基因，PINCH是一个肿瘤相关间质细胞标记物，而FXYD3在有些肿瘤中充当癌基因的角色，在另一些肿瘤中则作用相反。所以，深入研究这三者在肿瘤发生、发展中的作用及其相互关系具有十分重要的意义。
食管鳞癌和胃腺癌在世界范围内属于十大恶性肿瘤之列，在我国更是名列前茅。迄今为止，由于其病因、病机不明，所以临床治疗效果有限。据统计，中晚期食管鳞癌和胃腺癌的5年生存率分别不足10％和20％。因此，进一步加强对其病因和病机的探讨，具有非常重要的意义。
结合文献查新，发现除了我们的前期有关文献报道外，目前尚无FXYD3及PINCH在食管鳞癌和胃腺癌中的研究报道，更没有FXYD3、PINCH和P33ING1b蛋白在食管鳞癌和胃腺癌中的联合检测及相关性研究报道。为此，本研究应用免疫组织化学技术检测人食管鳞癌和胃腺癌组织中FXYD3、PINCH和P33ING1b蛋白的表达情况，分析它们与临床病理特征的关系，并探讨它们三者之间的相关性;同时，通过体外细胞培养、细胞转染、免疫细胞化学、流式细胞术及RT-PCR等方法，研究FXYD3的表达对人食管鳞癌T.Tn细胞的作用及其作用机制。为进一步阐明食管鳞癌和胃腺癌发生、发展的机制提供新的理论依据。
方法:
1.探讨P33ING1b蛋白的胞质表达与食管鳞癌发生、发展的关系收集河北医科大学第一医院病理科2000-2004年间临床病理资料完整的食管鳞癌组织蜡块64例及相对应的肿瘤远断端的正常食管粘膜组织20例。所有病人术前均未经放疗和化疗。经常规HE染色，根据WHO肿瘤病理诊断标准进行病理学分级。所有切片均经两名病理专家确认。应用免疫组织化学ABC法，检测P33ING1b蛋白在食管鳞癌组织中的表达情况，并分析其与临床病理特征之间的关系以及与PINCH蛋白表达的相关性。
2.探讨FXYD3在食管鳞癌中的表达及其临床病理意义应用免疫组织化学ABC法检测了64例食管鳞癌组织和20例正常食管粘膜组织中FXYD3蛋白的表达情况，探讨FXYD3蛋白在食管鳞癌中的表达与患者性别、年龄、肿瘤位置、大小、组织学分级、浸润深度、TNM分期及淋巴结转移情况等病理变量之间的关系，并进一步分析其与PINCH蛋白表达的相关性。
3.探讨FXYD3对人食管鳞癌T.Tn细胞体外增殖的作用及其作用机制选用人食管鳞癌细胞株T.Tn细胞进行体外培养，应用脂质体法瞬时转染FXYD3高表达的T.Tn细胞;采用RT-PCR和免疫细胞化学法分别检测实验组和对照组细胞FXYD3-mRNA和蛋白的表达水平;MTT法检测细胞增殖抑制率;胎盼蓝染色后计数活细胞数;流式细胞术分析细胞周期分布。
4.P33ING1b蛋白在胃腺癌组织中的表达意义及与FXYD3和PINCH蛋白表达的相关性研究应用免疫组织化学SP法检测了73例胃腺癌组织和30例正常胃粘膜组织中P33ING1b蛋白的表达情况，探讨胃腺癌中P33ING1b蛋白的表达与临床病理变量之间的关系，并结合前期实验结果，分析其与FXYD3和PINCH蛋白表达的相关性。
结果:
1.P33IG1b蛋白的胞质表达与食管鳞癌的发生、发展有关免疫组织化学染色结果显示，P33ING1b蛋白在正常食管粘膜组织中仅表达于细胞核，其阳性表达率为95％，在食管鳞癌组织中，P33ING1b蛋白则以胞质和胞核共同表达为主，阳性表达率为36％，二者相比，差异有统计学意义(P＜0.0001);另外，P33ING1b蛋白在伴有淋巴结转移组的胞质阳性表达率明显高于无淋巴结转移组(P=0.001);而且P33ING1b蛋白在肿瘤细胞胞质中的表达与PINCH蛋白表达呈正相关(P＜0.0001)，两种蛋白同时表达阳性的病例具有较高的淋巴结转移率(P=0.001); P33ING1b蛋白的胞质表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小、位置及肿瘤分化程度均无关(P＞0.05）。提示P33ING1b蛋白由胞核表达转移到胞质表达，可能使其丧失了正常的抑癌功能，在食管鳞癌的发生、发展中可能具有重要意义;食管鳞癌组织中，P33IG1b蛋白在瘤细胞胞质中的阳性表达与PINCH蛋白在肿瘤相关间质细胞中的阳性表达呈正相关。
2.FXYD3在食管鳞癌中的表达及其临床病理意义实验结果显示，由正常食管粘膜到食管鳞癌组织，FXYD3蛋白的阳性表达率明显上升(15％ Vs59％，P=0.001)，差异有统计学意义;FXYD3表达与肿瘤浸润深度和TNM分期均有关，FXYD3在TNM的(Ⅱ+Ⅲ+Ⅳ)期及在肿瘤浸润超过粘膜下层组的表达分别明显高于TNM(Ⅰ)期和肿瘤浸润未超过粘膜下层组，差异有统计学意义（P值分别为0.008和0.041）;伴有淋巴结转移组的FXYD3蛋白表达阳性率高于无淋巴结转移组(75％Vs52％，P=0.086)，差异趋于有一定的统计学意义;而且FXYD3蛋白的阳性表达也趋于与PINCH蛋白的阳性表达有一定的相关性(P=0.063)，两种蛋白表达同时阳性的病例具有更高的淋巴结转移率(P=0.001);然而，FXYD3蛋白的表达与患者的性别、年龄、肿瘤位置、大小、分化程度及5年生存率均无关(P＞0.05)。提示食管鳞癌中FXYD3蛋白的过表达可能与肿瘤的发生、发展有关;而且与PINCH蛋白在间质细胞中的阳性表达趋于呈正相关关系。
3.FXYD3对人食管鳞癌T.Tn细胞体外增殖的作用及其作用机制转染后72小时，si-FXYD3组的FXYD3 mRNA和蛋白量均明显下调;FXYD3-siRNA对T.Tn细胞的生长有明显的抑制作用;活细胞计数与对照组相比明显减少;细胞的S期和G2/M期明显升高。表明FXYD3-siRNA能够阻滞T.Tn细胞停留于S期和G2/M期。提示FXYD3的过表达对T.Tn细胞的体外增殖具有一定的促生长作用。
4.P33ING1b蛋白在胃腺癌组织中的表达意义及与FXYD3和PINCH蛋白表达的相关性正常胃粘膜组织中，P33ING1b蛋白阳性表达部位均在细胞核中，胞质中无明显表达;而在胃腺癌组织中，其阳性部位则以胞核和胞质共同表达为主，有的甚至仅有胞质表达。P33ING1b蛋白在正常胃粘膜组织和胃腺癌组织中的阳性表达率相比，差异有统计学意义(97％ Vs60％，x2=13.642，P=0.0001); P33ING1b蛋白在胃腺癌中的表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、浸润深度及淋巴结转移情况均无关(P＞0.05)，但与肿瘤的分化程度有关，高分化组的阳性表达率(76％)明显高于低分化组(44％)，二者相比，差异有统计学意义（P=0.006）;P33ING1b蛋白在胃腺癌中的阳性表达与PINCH蛋白的阳性表达之间趋于存在正相关关系（r=0.159，P=0.051），但与FXYD3蛋白的阳性表达之间无明显相关性(r=0.138，P=0.160)。提示P33ING1b蛋白在胃腺癌中的表达下调及部位改变，可能与胃腺癌的发生和分化有关;PINCH蛋白在肿瘤间质细胞中的阳性表达与P33ING1b蛋白在肿瘤细胞中的阳性表达趋于有一定的正相关关系。
结论:
1.P33ING1b蛋白由胞核转移到胞质表达，可能导致其正常抑癌功能的下降和丧失，并在食管鳞癌的发生、发展中具有一定的意义;并且，首次报道了食管鳞癌中PINCH蛋白在肿瘤间质中的阳性表达与P33ING1b蛋白在肿瘤细胞中的阳性表达呈正相关关系。
2.首次进行了FXYD3蛋白在人食管鳞癌组织中表达的检测，FXYD3蛋白在食管鳞癌组织中的表达与肿瘤浸润深度和TNM分期有关。提示FXYD3蛋白的过表达与食管鳞癌的浸润和发展有关。在伴有淋巴结转移的病例中，FXYD3蛋白与PINCH蛋白的阳性表达呈明显的正相关关系。
3.首次应用RNAi技术探讨了FXYD3表达在食管鳞癌细胞中的作用。发现FXYD3-siRNA能有效抑制人食管鳞癌T.Tn细胞中FXYD3mRNA和蛋白质的表达。FXYD3被抑制后，可引起T.Tn细胞的体外增殖抑制。表明FXYD3高表达对T.Tn细胞具有一定的促生长作用。
4.胃腺癌组织中P33ING1b蛋白的表达下调及表达部位的改变，可能与胃腺癌的发生、分化有关;并首次提出胃腺癌组织中PINCH蛋白的阳性表达与P33ING1b蛋白的阳性表达趋于具有一定的正相关关系。