论文部分内容阅读
pH敏感型纳米颗粒在诸如肿瘤药物传递载体等领域具有广泛应用。病毒样颗粒(Virus-like particle，VLP)具有丰富的可修饰表面位点，纳米尺度的空腔结构和良好的生物相容性，易于通过结构蛋白改造调控其结构。因此，本文通过引入pH敏感模块改造VLP以构建pH敏感型VLP。
首先在鼠多瘤病毒(Murine polyomavirus，MPV)结构蛋白VP1的HI环中分别引入8个天冬氨酸和8个精氨酸，构建负电型VP1(m-VP1)和正电型VP1(m+VP1)。通过pQE-80L-wtVP1、pQE-80L-m-VP1和pQE-80L-m+VP1重组质粒构建和大肠杆菌表达制备蛋白。确定最优表达条件为：当菌液OD600值约为0.5时开始诱导，诱导剂为0.6mmol/LIPTG，诱导时间为22h。所得m-VP1、m+VP1和野生型VP1(wtVP1)产量分别为80.0mg/(L培养基)，77.4mg/(L培养基)和113.2mg/(L培养基)。
然后检测VLP自组装及其pH响应性能。结果表明，等摩尔混合的m-VP1和m+VP1可以成功组装成粒径40-50nm的突变型VLP(mVLP)，其形态大小与野生型VLP(wtVLP)一致。而且，自组装过程中OD350值监测表明，mVLP在pH8.0时自组装效率较高，优于野生型，而在pH偏离此值时自组装效率降低，证实mVLP具有pH敏感性，已成功构建pH敏感型MPVVLP。
首先在鼠多瘤病毒(Murine polyomavirus，MPV)结构蛋白VP1的HI环中分别引入8个天冬氨酸和8个精氨酸，构建负电型VP1(m-VP1)和正电型VP1(m+VP1)。通过pQE-80L-wtVP1、pQE-80L-m-VP1和pQE-80L-m+VP1重组质粒构建和大肠杆菌表达制备蛋白。确定最优表达条件为：当菌液OD600值约为0.5时开始诱导，诱导剂为0.6mmol/LIPTG，诱导时间为22h。所得m-VP1、m+VP1和野生型VP1(wtVP1)产量分别为80.0mg/(L培养基)，77.4mg/(L培养基)和113.2mg/(L培养基)。
然后检测VLP自组装及其pH响应性能。结果表明，等摩尔混合的m-VP1和m+VP1可以成功组装成粒径40-50nm的突变型VLP(mVLP)，其形态大小与野生型VLP(wtVLP)一致。而且，自组装过程中OD350值监测表明，mVLP在pH8.0时自组装效率较高，优于野生型，而在pH偏离此值时自组装效率降低，证实mVLP具有pH敏感性，已成功构建pH敏感型MPVVLP。