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目的:利用短发夹RNA(Short hairpin RNA,shRNA)重组干扰质粒抑制Bcl-2基因表达,观察其对非小细胞肺癌NCI-H460的细胞凋亡和放射敏感性变化的影响。
方法:将特异性抑制Bcl-2基因表达的干扰质粒Bcl-2/shRNA稳定转染NCI-H460细胞,获得H460-RNAi细胞,同时设转染含无义序列Neg-shRNA质粒的H460-Neg细胞及未转染的H460细胞为对照组,采用Western blot法,观察Bcl-2基因在蛋白表达水平的变化;X射线照射后,采用细胞形态学及克隆形成实验,检测RNA干扰对NCI-H460细胞凋亡和放射敏感性的影响。
结果:成功将重组质粒转染至NCI-H460细胞。与H460细胞和H460-Neg细胞相比,H460-RNAi细胞的Bcl-2蛋白表达水平明显降低(t=88.54,P＜0.05;t=87.45,P＜0.05),H460-Neg细胞和H460细胞比较差异无统计学意义(t=1.09,p=0.32);未照射时H460-RNAi细胞的凋亡率[(10.76±0.73)％]明显高于对照组(t=-17.99,p＜0.05;t=-14.87,p＜0.05),4Gy X线照射48h后H460-RNAi细胞的凋亡率[(24.94±1.41)％]明显高于其余两组(t=-26.70,p＜0.05:t=-24.95,p＜0.05)及未照射的H460-RNAi细胞(t=-17.85,p＜0.05)。采用多靶单击数学模型拟合细胞存活曲线,求出三组Do、Dq、N及SF2值H460细胞组分别为1.39、1.39、2.72和0.52;H460-Neg细胞组分别为1.21、1.28、2.87和0.46;H460-RNAi细胞组分别为0.97、0.75、2.18和0.26,可见所有细胞存活参数,H460-RNAi细胞组明显低于其它两组,而其它两组的存活参数相差不明显。
结论:Bcl-2基因的表达水平与非小细胞肺癌NCI-H460细胞的放射敏感性成负相关;Bcl-2/shRNA重组干扰质粒可以有效抑制非小细胞肺癌NCI-H460细胞内的Bcl-2蛋白的表达水平;抑制Bcl-2基因表达可以增加非小细胞肺癌NCI-H460细胞的凋亡,且增强放疗诱导的凋亡及放射敏感性。