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近年来,流感在世界范围内频繁爆发,严重威胁人类的生命健康,也给养殖业造成巨大损失,与此同时,流感病毒还可以跨越种间屏障,感染犬和猫。犬、猫作为伴侣动物携带流感病毒,在病原学、生态学及流行病学中占有举足轻重的作用,具有重要的公共卫生学意义。本研究中的三株病毒均是在犬中分离到的H3N2亚型流感病毒,分别命名为:A/canine/Guangzhou/01/2006(H3N2),A/canine/Guangzhou/02/2006(H3N2),A/canine/Guangzhou/03/2007(H3N2)(以下分别简称CGZ1、CG22、CG23)。本试验旨在建立犬源H3N2亚型流感病毒的动物模型。
通过接种9~11d非免疫鸡胚,检测三株病毒的EID50。研究结果表明:CGZ1、CG22、CG23对鸡胚的半数感染量(EID50)分别为:10-3.64/0.1ml、10-2.67/0.1ml、10-3.12/0.1ml。
分别通过气管注射、滴鼻接种、同居感染三种方法进行犬的发病试验。结果显示,三个毒株引起犬的症状相似,主要表现为体温升高,流鼻液,咳嗽,食欲减退,呼吸困难等,其中犬接种病毒后表现为体温升高,第4d达到高峰,同居对照的犬于第6d达到高峰,随后体温开始恢复正常。
采用石蜡切片,通过HE染色观察试验犬各组织、器官的病理学变化。研究结果表明:感染犬肺淤血、出血,肺泡破裂,淋巴细胞浸润;小肠粘膜上皮坏死,粘膜下层水肿;肝脏淤血;肝脂肪变性、坏死;心肌纤维坏死;脾、淋巴结、淋巴细胞坏死崩解;肾出血、瘀血,肾小管上皮细胞变性坏死。
运用全自动生化分析仪检测试验犬血清各项生化指标。研究结果表明:三株试验犬生化指标变化规律相似,血清中的丙氨酸氨基转移酶(谷丙转氨酶)、天门冬氨酸氨基转移酶(谷草转氨酶)、碱性磷酸酶明显升高(P<0.05);白蛋白、尿素氮明显下降(P<0.05);总蛋白轻微升高(P>0.05);肌酐轻微下降(P>0.05);钙、磷轻微下降后又升高(P>0.05)。
运用全自动血液分析仪检测试验犬血常规各项指标。研究结果表明:白细胞计数、红细胞计数、血红蛋白、血细胞比容、平均红细胞体积、红细胞平均血红蛋白量、血小板、淋巴细胞显著减少(P<0.05);平均红细胞血红蛋白浓度显著增加(P<0.05)。
通过HI试验检测血清中流感病毒抗体。研究结果表明:气管注射与滴鼻接种组接种CGZ1株病毒后1~5d,同居对照组1~7d,其血清中不能检测出HI抗体,气管注射与滴鼻接种组接种后7~9d,同居对照组接种后9d,可以在血清中检测到抗体;气管注射、滴鼻接种和同居对照组接种CG22、CG23株病毒后1~5d,其血清中不能检测出HI抗体,接种病毒后7~9d可以在其血清中检测到HI抗体。
将采集的试验犬各组织、器官研磨后接种鸡胚,检测体内病毒病毒分布情况。研究结果表明:试验犬接种CGZ1株病毒后,第3d、6d均可以在肺脏、肾脏中检出病毒,同居对照组也可以于第6d在肺脏、肾脏中检出病毒。其中滴鼻接种组第3d可在脑和小肠中检出病毒。CG22株接种试验犬后,第3d可在肺脏、心脏、脑、肾脏、肝脏中检出病毒,第6d气管注射组仅在肺中检测出病毒;滴鼻接种组可以在肺脏、心脏、脑中检测出病毒;同居对照组可以在肺脏、心脏中检测出病毒。CG23株第3d只可以在肺中检测出病毒,第6d时可以在肺脏、心脏、肾脏中检测出病毒。根据试验结果可以得出,三株毒株均可以在肺脏中检测出病毒,并且第6d的病毒滴度比第3d高。