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本论文研究了鱼腥草素钠的体外和体内免疫调节作用及其血清药理学。
在体外试验中,分别制备脾脏和外周血淋巴细胞,以MTT法测定不同浓度的鱼腥草素钠对脾脏和外周血淋巴细胞增殖的影响。结果表明,鱼腥草素钠在2~16μg/mL的浓度范围内,能够显著促进淋巴细胞增殖(P<0.05),且与ConA具有协同作用,其中以终浓度为4μg/mL效果最明显。但鱼腥草素钠在64μg/mL时对外周血淋巴细胞增殖有明显的抑制作用,这可能是高浓度的鱼腥草素钠对细胞分裂有一定的抑制作用。结果提示,鱼腥草素钠能促进细胞免疫,从而提高机体的免疫功能。
在体内试验中,为探讨鱼腥草素钠对肉鸡的免疫调节作用,将160只1日龄非免疫健康雏鸡随机分为4组,即高剂量组(A)、中剂量组(B)、低剂量组(C)和疫苗对照组(D)。各组鸡于7日龄用NDV LaSota株弱毒活疫苗滴鼻点眼,进行第一次免疫,两周后以同样方法加强免疫一次,并在第二次免疫的当日灌胃给药,各组给药剂量分别为150、100、50和0mg/kg,连续7天给药,D组灌服等量的生理盐水。各试验组分别于第一次免疫后的14、21、28和35天,随机抽取8只鸡并称重,然后翅下静脉采抗凝血2mL,用于外周血淋巴细胞的增殖试验和红细胞免疫试验;采非抗凝血5mL,分离血清,用于测定各组鸡的抗NDV血凝抑制抗体效价、血清生化指标和细胞因子,同时宰杀鸡并完全剥离鸡胸腺、脾脏和法氏囊进行称重。结果表明,试验后期(第28和35d),B、C组的法氏囊指数均显著高于D组(P<0.05);第28d时B、C组的脾脏指数均显著高于D组(P<0.05),第35d时各试验组的脾脏指数与对照组比较,差异显著(P<0.05);第28d时A、B、C组的胸腺指数均显著高于D组(P<0.05)。结果说明,鱼腥草素钠能提高肉鸡的免疫器官指数和促进免疫器官的发育。
不同剂量的鱼腥草素钠均能直接或协同ConA促进外周血淋巴细胞的增殖。中剂量(100mg/kg)的促增殖作用最强。在第35d时促细胞增殖作用达到最高水平。
各给药组鸡的红细胞C3b受体花环率均高于对照组,在初次免疫后的第21d和28d时,中剂量组与对照组差异显著(P<0.05),表明在免疫初期适当剂量的鱼腥草素钠能提高红细胞C3b受体花环率,增强红细胞免疫功能。在整个试验过程中,红细胞RBC—IC花环率呈逐渐升高的趋势。
初免后14—35天的抗体水平呈逐渐上升的趋势。第28d和35d时各组抗体效价均高于对照组(P<0.05),以中剂量100mg/kg提高抗体效价的作用最强。表明鱼腥草素钠与LaSota疫苗合用能提高鸡体抗NDV抗体效价。
在初免后的不同时间,各给药组的IFN—γ、IL—2和IL—4的浓度均高于对照组,在试验的后期,差异显著性才表现出来。在第28和35天时,中剂量B组的IFN—γ、IL—2和IL—4的浓度均显著高于对照组(P<0.05)。表明鱼腥草素钠能提高疫苗免疫后肉鸡血清中细胞因子的水平。
以鸡脾脏T淋巴细胞的增殖活性为指标,用血清药理学的方法探讨鱼腥草素钠的免疫调节作用。采用MTT法,观察了不同的给药剂量、给药天数的含药血清对脾淋巴细胞增殖作用。结果表明,在给药第5d和7d时,与空白组比较,各剂量组均能促进脾脏淋巴细胞的增殖,且中剂量的促增殖作用显著(P<0.05)。随着给药天数的增加,试验血清对肉鸡脾脏淋巴细胞的增殖作用呈现一定的增强趋势。
为了进一步探讨鱼腥草素钠的药理作用,试验组按400mg/kg剂量,每天2次,连续7d灌胃给药,于最后一次给药后30nun、1h、1.5h、2h、2.5h和3h,采取血清进行脾脏淋巴细胞增殖活性检测。结果表明,在给药后的30min~3h内,含药血清均对肉鸡脾淋巴细胞有促进作用,其中以1h的作用最显著。