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目的：
虽然在人脑胶质细胞瘤中发现有STAT3的异常表达,但是对STAT3信号通路在胶质瘤发生发展中的作用尚未深入开展。本实验通过应用不同浓度的锯叶棕提取物对人脑胶质瘤细胞U87的作用,观察锯叶棕提取物对U87细胞增殖的影响,以及锯叶棕提取物对U87细胞的磷酸化STAT3和凋亡相关蛋白表达的影响。从而,了解STAT3通路对胶质瘤的作用,以及为STAT3成为胶质瘤治疗靶点和锯叶棕治疗胶质瘤提供依据。
方法：
体外培养U87细胞将人脑胶质瘤细胞株(U87)置于含10%胎牛血清(FBS)的DMEM培养基中,并加入适量青霉素/链霉素,在37℃,5%二氧化碳,饱和湿度的恒温孵育箱中培养。
MTT比色法应用MTT比色法测定细胞的增殖活性,将细胞加入含不同浓度锯叶棕提取物(0-2μl/ml)的96孔培养板内,培养48小时后检测依赖线粒体转化形成有染色的甲瓒产物-噻唑蓝MTT,从而测定细胞增殖活力。
WesternBlotting方法应用WestemBlot法检测pSTAT3、PARP蛋白表达的变化。按照标准方法制备细胞裂解液,取一定量的蛋白质用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳,然后转移到聚偏二氟乙烯纤维素膜,进一步检测待测抗体,如抗-PARP,抗-p-STAT3,抗-β-肌动蛋白抗体,将印迹应用增强化学发光法试剂盒显影。
结果：
MTT比色法检测结果显示:不同剂量锯叶棕提取物处理U87细胞,与对照组比较,各药物处理组具有显著的生长抑制作用,有统计学意义(P＜0.05)。
WesternBlot法检测结果显示:锯叶棕提取物预处理的U87细胞,PARP蛋白的表达比较未经处理的有显著增高,有统计学意义(P＜0.05);p-STAT3蛋白的表达水平与未经处理p-STAT3蛋白的表达水平比较有显著下降,有统计学意义(P＜0.05)。
结论：
1、锯叶棕提取物有效抑制人脑胶质瘤U87细胞增殖。
2、锯叶棕提取物抑制STAT3的磷酸化,所以锯叶棕提取物可能通过抑制STAT3信号转导,诱导胶质瘤细胞的生长停滞和凋亡。STAT3可能成为胶质瘤治疗的潜在靶点。本实验为胶质瘤治疗的发展提供了新机遇。锯叶棕提取物可能有益于胶质瘤的治疗。