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在目前正在执行的国家标准中,矿泉水国家标准致病菌针对性不强和缺乏溴酸盐含量要求,同样在食品卫生微生物检验标准(GB/T4789.1—2003)中所使用的培养基也没有质量控制国家标准。迄今国际食品法典委员会(CAC)CODEXSTAN108-1981.Rev-19971《天然矿泉水法典标准》中具体规定了致病菌检测项目(铜绿假单胞菌检验、粪肠球菌检验和亚硫酸盐还原菌检验),同时国际标准化组织(ISO)也规定了检验其所用培养基;另外,世界卫生组织、欧盟和美国药监局规定矿泉水中溴酸盐限量值为10μg/L;同时ISO于2000年和2003年陆续出台了培养基质量控制标准。为了与国际接轨,本论文针对中国饮料工业协会天然矿泉水专业委员会正在修改的新版矿泉水国家标准和广东省微生物研究所主持并正在制订的食品卫生微生物检验培养基国家标准,对矿泉水致病菌检测用选择性培养基、国内外主要矿泉水原水溴化物和成品水溴酸盐含量,以及培养基质量控制进行了研究,以期为新的国家标准提供基础材料。
1.矿泉水致病菌检测所用选择性培养基研究
生长率采用滤膜法测定,铜绿假单胞菌、粪链球菌和产气荚膜梭菌(亚硫酸盐还原菌的代表菌株)在选择性培养基(Drakes19、十六烷三甲基溴化铵琼脂培养基A、十六烷三甲基溴化铵琼脂培养基B、KF粪肠球菌琼脂培养基、无卵黄—胰蛋白胨—亚硫酸盐—环丝氨酸琼脂培养基(TSC)及亚硫酸盐-多粘菌素-磺胺嘧啶琼脂培养基(SPS))的生长率95%置信区间分别为(93.8%,118.6%)、(20.3%,26.6%)、(85.1%,103.3%)、(83.8%,108.1%)、(90.9%,112.3%)和(77.9%,99.4%),大肠埃希氏菌在以上六种选择性培养基上均被抑制。
2.国内主要瓶装饮用水产品的致病菌含量调查研究
市场抽查雀巢天然矿泉水、怡景饮用矿物质水、天源长寿村天然矿泉水等22种瓶装饮用水细菌总数为1-5cfu/500mL,均未检出致病菌。
3.矿泉水原水溴化物和成品水溴酸盐含量调查研究
广泛调研了国内外矿泉水成品水溴酸盐含量和国内矿泉水原水溴化物含量,用离子色谱仪检测溴酸盐和溴化物浓度。
矿泉水成品水溴酸盐含量分布情况:
<3μg/L占56%,>3μg/L占44%,>10μg/L占29%,>20μg/L占20%,>25μg/L占14%;
矿泉水原水中溴化物含量分布情况如下:
<20μg/L占16%,20μg/L~50μg/L占20%,50μg/L~100μg/L占23%,>100μg/L占41%。
4.国内外液体和固体培养基主要产品的质量研究
选购三个国内和三个国外厂家的九种培养基(乳糖胆盐发酵管、乳糖发酵管、月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤(LST)、煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)EC肉汤、平板计数培养基(PCA)、营养琼脂(NA)、结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)和Baird-Parker氏培养基),观察相应质控菌株在其上生长的效果,并与国际标准比较,以了解这些培养基的质量。
液体培养基生长质控菌培养以后均达到混浊度2,产气1/3的标准,选择性质控菌均被抑制,固体培养基中,基础培养基质控菌生长率均大于70%,选择性培养基生长率均达50%以上,选择性质控菌均未生长,特异性质控菌在相应培养基上均呈现标准菌落。
5.食品卫生微生物检验培养基标准的拟定
内容包括固体和液体培养基的定量、半定量和定性质量控制方法以及部分培养基具体的质量控制标准。
检测矿泉水中粪肠球菌所用的的KF链球菌琼脂培养基,检测铜绿假单胞菌所用的的Drakes19、十六烷三甲基溴化铵琼脂培养基A和检测产气荚膜梭菌所用的TSC和SPS,目标菌在其上的生长率均符合国际标准(>70%)。此六种选择性培养基对非目标菌的选择性均较好。市售瓶装饮用水的微生物指标均较理想(细菌总数为1-5cfu/500mL,均未检出致病菌)。所调研的矿泉水原水中溴化物和成品水中溴酸盐含量均较高,应当及时采取适当措施。本研究调查的国内外六家九种培养基质量均较达国际标准。在国内外培养基质量调查研究的基础上,目前已经初步拟定培养基质量控制国标。