IgG4对巨噬细胞介导的ADCP模型影响的研究

• 作 者: 周俊杰
• 机 构: 汕头大学
• 出 处: 汕头大学
• 发表日期: 2019年1期
• 关键词: 食管癌

背景和目的
　　免疫球蛋白G（IgG）是体液免疫的重要组成部分。IgG4，是人体内含量最少的IgG亚型，已有报道IgG4在肿瘤病人体内会升高并影响病人的免疫功能。巨噬细胞是一种常见的免疫细胞，能够介导抗体依赖细胞吞噬作用（ADCP）。巨噬细胞主要分为两种亚型，M1和M2，两者在肿瘤免疫中发挥着相反的作用。近年来上市的单克隆抗体据报道可通过介导ADCP对特定的肿瘤细胞进行杀伤。那么在肿瘤微环境中增加的IgG4对巨噬细胞介导的对肿瘤细胞的ADCP是否存在干扰，我们为此进行了相关的探讨。
　　材料方法
　　材料：
　　食管癌肿瘤组织来自汕头大学附属肿瘤医院及粤东病理会诊中心，正常人血液标本来自汕头大学医学院志愿者。
　　所用细胞系为B淋巴细胞肿瘤细胞系Raji。
　　方法：
　　免疫组化染色（IHC）：观察食管癌组织CD68和CD163的表达。
　　蛋白提取：层析柱分离IVIG或者正常人血浆中的IgG1和IgG4。
　　磁珠分选：分选CD14+单核细胞。
　　蛋白质免疫印迹：验证提取的IgG1和IgG4的纯度。
　　流式细胞术：细胞Marker的表达，验证M1和M2巨噬细胞分化，检测ADCP中巨噬细胞对Raji细胞的吞噬作用。
　　吉姆萨染色：将培养的细胞进行固定染色，显微镜下统计细胞吞噬率。
　　结果
　　共收集食管癌病人肿瘤相关组织40例。IHC发现癌组织有同时CD68CD163阳性的细胞。
　　蛋白质免疫印迹验证了提纯的蛋白分别为IgG1和IgG4，并且没有交叉污染。
　　流式细胞术验证了M1巨噬细胞的IL-1β、IL-12、TNF-α表达比M2高，M2的CD163表达比M1高。
　　ADCP模型构建及相关实验，通过吉姆萨染色，统计吞噬细胞数量，结果M1和M2型巨噬细胞在利妥昔单抗介导下，都可以吞噬Raji细胞。利妥昔单抗浓度梯度实验中，在单抗浓度在1-10μg/mL，巨噬细胞对Raji细胞的吞噬率达到最高。加入IgG4后，利妥昔单抗介导的ADCP吞噬率低于阳性对照组，加入IgG1后没有明显差别。
　　结论
　　1、在体外培养的巨噬细胞M1和M2，在利妥昔单抗介导的条件下，都能够有效的进行对Raji细胞的吞噬作用。
　　2、IgG4可以降低利妥昔单抗介导的巨噬细胞对Raji细胞的ADCP作用。