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甲型流感病毒(InfluenzaAvirus，IAV)是一种常见的呼吸道病毒，通过抗原飘移和抗原转变可不断产生新毒株。IAV感染常引起急性肺损伤(Acutelunginjury，ALI)，其中少数患者可发展成急性呼吸窘迫综合征(acuterespiratorydistresssyndrome，ARDS)，最终死于多器官衰竭(multipleorganfailure，MOF)。20世纪以来的多次大流行已造成千万人死亡。疫苗是防控IAV的主要策略，但IAV抗原高变异性导致其疫苗设计和生产仍不能满足现实需求。目前抗IAV药物主要是奥司他韦（达菲）及其衍生物，但近年来其耐药株已快速出现。因此，开发新型抗IAV药物是必要且紧迫的。目前研究发现AMPK-SIRT1-PPARs-PGC-1α信号通路不仅可调控糖/脂代谢及线粒体质量，激活该信号通路还具有抗炎、抗衰老和抗病毒（包括IAV）等作用。本研究拟以该信号通路作为靶点，构建高通量药物筛选模型，从传统中草药中筛选抗IAV药物，并对筛选出的药物及其活性单体进行药效及药理机制研究。
利用分子克隆技术，以人基因组为模板，PCR扩增PPARα、PPARγ(PPARγ1，PPARγ2，PPARγ3，PPARγ4)、AMPK、SIRT1和PGC-1α启动子，分别克隆入pGL3-basic荧光素酶报告质粒。转染A549细胞，通过检测双荧光素酶活性，构建高通量药物筛选模型，并以阳性药物（激动剂）进行模型验证。结果显示：pPPARγ4-luc、pSIRT1-luc和pPGC-1α-luc三个模型构建成功。本研究最终选择pSIRT1-luc模型对134味中药粗提物进行初步筛选，发现栀子炭、秦艽、积雪草和蔓荆子等9味中药能显著提高SIRT1启动子转录活性。利用TCID50和空斑抑制试验测定京尼平（genipin）（栀子活性单体）、龙胆苦苷（gentiopicroside）（秦艽活性单体）、积雪草苷（asiaticoside）（积雪草活性单体）和蔓荆子黄素（vitexicarpin）（蔓荆子活性单体）抗IAV活性，结果显示：京尼平与龙胆苦苷可显著抑制PR8增殖，而积雪草苷与蔓荆子黄素抗PR8活性不显著。Westernblot、ELISA等试验结果显示：京尼平与龙胆苦苷均显著增加SIRT1、PPARγ和PGC-1α表达；京尼平显著抑制IAV诱导的p38/JNK/ERKMAPK磷酸化，龙胆苦苷也显著抑制IAV诱导的p38/ERKMAPK激活，但对JNK不显著；京尼平与龙胆苦苷均显著抑制IAV诱导的促炎因子表达。体内试验显示：京尼平与龙胆苦苷能明显提高小鼠生存时间，减轻肺水肿；TCID50、qRT-PCR和病理切片显示：京尼平与龙胆苦苷均能显著降低肺内病毒滴度，减少促炎症因子产生，改善肺组织病理损伤。
综上，我们成功构建了pSIRT1-luc、pPPARγ4-luc和pPGC-1α-luc高通量药物筛选模型，并用pSIRT1-luc模型进行了药物筛选，发现9味具高活性的中药；并对其中高活性中药的活性单体进行研究，发现京尼平与龙胆苦苷具有良好的抗IAV活性，具有很好的进一步开发利用价值。另，pPPARγ4-luc和pPGC-1α-luc两模型的药物筛选正在进行中；几个活性单体将做为“新型SIRT1转录激活剂”申报专利。
利用分子克隆技术，以人基因组为模板，PCR扩增PPARα、PPARγ(PPARγ1，PPARγ2，PPARγ3，PPARγ4)、AMPK、SIRT1和PGC-1α启动子，分别克隆入pGL3-basic荧光素酶报告质粒。转染A549细胞，通过检测双荧光素酶活性，构建高通量药物筛选模型，并以阳性药物（激动剂）进行模型验证。结果显示：pPPARγ4-luc、pSIRT1-luc和pPGC-1α-luc三个模型构建成功。本研究最终选择pSIRT1-luc模型对134味中药粗提物进行初步筛选，发现栀子炭、秦艽、积雪草和蔓荆子等9味中药能显著提高SIRT1启动子转录活性。利用TCID50和空斑抑制试验测定京尼平（genipin）（栀子活性单体）、龙胆苦苷（gentiopicroside）（秦艽活性单体）、积雪草苷（asiaticoside）（积雪草活性单体）和蔓荆子黄素（vitexicarpin）（蔓荆子活性单体）抗IAV活性，结果显示：京尼平与龙胆苦苷可显著抑制PR8增殖，而积雪草苷与蔓荆子黄素抗PR8活性不显著。Westernblot、ELISA等试验结果显示：京尼平与龙胆苦苷均显著增加SIRT1、PPARγ和PGC-1α表达；京尼平显著抑制IAV诱导的p38/JNK/ERKMAPK磷酸化，龙胆苦苷也显著抑制IAV诱导的p38/ERKMAPK激活，但对JNK不显著；京尼平与龙胆苦苷均显著抑制IAV诱导的促炎因子表达。体内试验显示：京尼平与龙胆苦苷能明显提高小鼠生存时间，减轻肺水肿；TCID50、qRT-PCR和病理切片显示：京尼平与龙胆苦苷均能显著降低肺内病毒滴度，减少促炎症因子产生，改善肺组织病理损伤。
综上，我们成功构建了pSIRT1-luc、pPPARγ4-luc和pPGC-1α-luc高通量药物筛选模型，并用pSIRT1-luc模型进行了药物筛选，发现9味具高活性的中药；并对其中高活性中药的活性单体进行研究，发现京尼平与龙胆苦苷具有良好的抗IAV活性，具有很好的进一步开发利用价值。另，pPPARγ4-luc和pPGC-1α-luc两模型的药物筛选正在进行中；几个活性单体将做为“新型SIRT1转录激活剂”申报专利。