【摘 要】
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乳糖酶,学名为β-半乳糖苷酶,能够特异性的水解p-D-半乳糖苷键,催化乳糖水解,生成葡萄糖和半乳糖。乳糖酶的应用范围非常广泛,它能够水解牛奶及乳制品中的乳糖,减少乳糖不耐
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乳糖酶,学名为β-半乳糖苷酶,能够特异性的水解p-D-半乳糖苷键,催化乳糖水解,生成葡萄糖和半乳糖。乳糖酶的应用范围非常广泛,它能够水解牛奶及乳制品中的乳糖,减少乳糖不耐症的发生；可以用于改良乳制品；用于分析检测等。目前工业上生产的乳糖酶成本高,本研究利用基因工程技术,尝试在大肠杆菌和毕赤酵母中表达外源的乳糖酶,对乳糖酶的酶学性质进行研究,发酵条件进行优化,得到如下结论：1)分别成功构建了pETDuet-1-lac4, pMAL-c2x-lac4, pET22b（+）-lac4, pET28a（+）-lac4四种不同质粒,并对其进行诱导表达,其中pET22b（+）-lac4重组质粒的乳糖酶的酶活达到最高2.121 U.mL-1发酵液。2)测定了pET22b（+）-lac4的重组酶的酶学性质,乳糖酶的最适pH 7.0,最适宜温度为45℃,在45℃保存4h酶活依然在80%以上,K+对于乳糖酶酶活基本没有影响,Mn2+,Ca2+浓度为分别为1 5 mM,25 mM时乳糖酶的酶活达到最大,Zn2+对于乳糖酶的酶活具有抑制作用。3)对于大肠杆菌的发酵条件,诱导的条件进行了优化,在甘油浓度为4%,酵母粉3%,蛋白胨3%的条件进行发酵,IPTG诱导浓度为0.5 mM,在28℃条件下诱导21 h,检测到的乳糖酶的酶活达到37.38 U.mL-1发酵液。4)成功构建了毕赤酵母的分泌型重组质粒,但没有检测到乳糖酶的酶活。
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