日本血吸虫新药物及疫苗靶点的研究——1、基于潜在药靶日本血吸虫腺苷酸转运蛋白的小分子化合物筛选及其靶点的相关研究;2、日本血吸虫疫苗候选靶点内皮分化相关因子-1的研究

来源 :华东理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:PeNgxionglifanG2
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日本血吸虫腺苷酸转运蛋白(Adenine nucleotide transporter,ANT)是日本血吸虫嘌呤代谢中的关键酶,与血吸虫的能量代谢以及细胞调亡都有密切关系,利用生物信息学工具预测其为潜在药物靶点,并通过蛋白同源建模、计算机小分子化合物虚拟筛选得到了可与SjANT特异性结合的94个化合物。本研究首先通过体外培养日本血吸虫技术,对经预测可与SjANT特异性结合的化合物进行了体外抗日本血吸虫活性测试,随后对SjANT基因在日本血吸虫各虫期转录本水平的差异表达进行了分析。结果筛选出了三个对成虫具有明显体外杀伤作用的化合物,其中两个对童虫具有明显的杀虫效果;同时在成虫、童虫、尾蚴及虫卵中都有检测到SjANT的转录本,说明该基因在日本血吸虫生存发育过程中的重要性。本研究不仅初步验证了利用计算机虚拟筛选技术进行药靶筛选方法的可行性,同时为我们提供了即能杀灭成虫又能杀灭童虫的候选先导化合物。 另外,为了揭示日本血吸虫发育及分化过程,寻找新的抗血吸虫药物靶点及疫苗和诊断靶点,本课题研究了日本血吸虫内皮分化相关因子-1(Endothelialdifferentiation-related factor-1,EDF-1)蛋白的相关功能。首先利用生物信息学软件预测了该基因及其编码蛋白的相关性质,RT-PCR扩增该基因并实现了该基因在原核体系中的表达及纯化。随后分别利用RT-PCR及Western blot对SjEDF-1不同虫期的表达情况及免疫原性进行了探讨,结果发现SjEDF-1的转录本表达存在着虫期特异性,该蛋白特异性地在成虫及童虫中表达,而且Western blot结果显示该蛋白具有显著的免疫原性,因此该蛋白是极具潜力的药物、疫苗及诊断候选靶点。
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