南美白对虾组织培养及药代动力学研究

来源 :湛江海洋大学 广东海洋大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:godboy549321336
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本文以南美白对虾为实验对象,对南美白对虾的血淋巴、类淋巴、肌肉、肝胰腺、心脏、甲壳下表皮组织进行了原代培养;比较研究了盐酸左氧氟沙星、乳酸环丙沙星两种药物在对虾体内的药代动力学,并且根据两种药物的药代动力学特征,选取左氧氟沙星作为模型药物,利用培养模型研究了左氧氟沙星在体外培养的对虾血淋巴细胞内的药代动力学,得出结果如下: 1.建立了南美白对虾组织原代培养的方法。南美白对虾组织原代培养的最适离散细胞方法是机械分离法,培养的最佳条件为:60%的2×L-15培养基添加20%的胎牛血清及20%的对虾肌肉提取液,pH7.O-7.2,培养最适温度27-28℃。六种组织细胞中,以血淋巴、类淋巴和肌肉组织细胞培养较易成活,大部分血淋巴细胞2小时即可贴壁,能存活7天以上,类淋巴组织细胞一天后即可迁出,能存活20多天。肌肉组织块易贴壁,迁出细胞2天能形成单层,存活15-17天。肝胰腺、心脏和甲壳下表皮细胞在体外均不能培养成活。对对虾类淋巴组织、心脏和甲壳下表皮进行了消化法培养,均不能使细胞在培养中成活。对虾自身血清对培养细胞存在毒害作用。 2.建立了测定左氧氟沙星、环丙沙星在对虾体内含量的荧光分光光度法。以荧光分光光度计为分析仪器,左氧氟沙星在给定的光谱条件下(λ<,EX>=290nm,λ<,EM>=460hm,狭缝均为3.0nm),在浓度0.03-2.00μg/ml的范围内线性关系良好。其回归方程为:F=129.986C+0.901(n=8),r<2>=0.9994,检测限为0.04μg/ml。环丙沙星在给定的光谱条件下(λ<,EM>=284nm、λEM=464nm,狭缝均为3.0nm),在浓度0.03-1.50μg/mL的范围内线性关系良好。其回归方程为:F=129.480C+1.065(n=9),r<2>=0.9992,检测限为O.06μg/ml。 3.根据测定组织的药时数据,认为氧氟沙星和环丙沙星两种药物在南美白对虾的血淋巴和肝胰腺组织中的药代动力学均符合开放性二室模型。左氧氟沙星在血淋巴和肝胰腺组织中的动力学方程分别为:C=29.7812e<-2.1612t>+7.7436e<-0.0495t>(r<2>=0.9854),C=21.8716le<-0.6764t>+11.2934e<-0.202t>(r<2>=0.9714)。环丙沙星在血淋巴和肝胰腺组织中的动力学方程分别为:C=15.085e<-10390t> +7.997e<-0.0402>(r<2>=0.9900),C=17.415<-0.0140t>+5.52le<-0.0140t>(r<2>=O.9238)。经计算两种药物用于细菌性疾病治疗的给药间隔分别为12小时和70小时,两种药物的休药期分别为12天和14天。 4.建立了左氧氟沙星在体外对虾血淋巴细胞内含量测定的方法。根据细胞内药时数据,认为 左氧氟沙星在体外血淋巴细胞内的药代动力学符合开放性一室模型。其动力学方程为:C=14.963(e<-0.0835t>-e<-0.0892t>)(r<2>=0.7948)。达峰时间T<,max>15.5小时,峰浓度时药物在胞内和胞外浓度比达31倍。在体外情况下,左氧氟沙星在血淋巴细胞内的吸收和释放均比较缓慢,细胞维持治疗水平(以左氧氟沙星对肺炎衣原体的MIC为标准)的胞内药物浓度时间为118小时(4.9天)。因此认为利用左氧氟沙星来治疗对虾立克次氏体和衣原体感染可行。胞内药物浓度降至MRL(0.05μg/m1)所需的时间为150小时,与左氧氟沙星和环丙沙星在南美白对虾体内血淋巴中降至同等血药浓度的理论时间134小时、169小时相比基本相近,而与左氧氟沙星在肝胰腺中降至同一药物浓度水平的理论时间268小时明显要短。故认为可利用左氧氟沙星在体外血淋巴细胞内的残留时间大体预测左氧氟沙星和环丙沙星在体内血淋巴中降至同等残留水平的时间。
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