【摘 要】
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该研究比较了改良CTAB法、试剂盒法以及SDS法提取大豆、玉米、油菜等七种植物产品总DNA的产量、纯度和效率.三种方法中,改良CTAB法提取植物总DNA的产量和纯度最高,且成本较低
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该研究比较了改良CTAB法、试剂盒法以及SDS法提取大豆、玉米、油菜等七种植物产品总DNA的产量、纯度和效率.三种方法中,改良CTAB法提取植物总DNA的产量和纯度最高,且成本较低,经济实用;试剂盒法次之,虽其提取效率较高,但价格昂贵;SDS法提取的总DNA提取液中因含有较多的PCR扩增抑制物,因此不适于作为PCR扩增模板.通过紫外吸收、琼脂糖凝胶电泳等实验比较得出,改良CTAB法和试剂盒法纯化所得到的DNA纯度均适用于PCR扩增等下游检测.在植物总DNA提取液产量和纯度均达到下游检测要求的基础上,对植物产品进行转基因成分定性和定量检测.通过DNAMAN PCR扩增引物设计软件设计了针对大豆、玉米等转基因植物中CaMV35S启动子、NOS终止子、FMV35S启动子等特异性引物,对PCR扩增条件进行优化,以上述优化的体系对七种植物产品进行转基因成分检测的初步筛选;在此基础上,根据不同植物产品中所转入的外源目标基因,通过PCR扩增进行品系检测和鉴定.PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳,结果表明:可得到预期大小的DNA片段,经过PCR扩增产物的回收、克隆、测序,对结果进行验证,可得到预期的测序结果.在定性检测的基础上,对阳性转基因植物产品进行实时荧光定量PCR检测.根据转入的外源基因的序列设计特异性引物和Taqman探针,通过在线分析基因起始拷贝数的方式,以不同含量的标准样品的Ct值制成标准曲线,再根据待测样品的Ct值可准确测定起始DNA的数量,通过内源基因Lectin校正系统检测误差,计算转基因植物产品的含量,检测灵敏度达到0.1﹪,误差0.3﹪-0.5﹪.
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