【摘 要】
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间隙连接通道(gap junctional channels)是相邻细胞之间直接进行小分子物质(分子量
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间隙连接通道(gap junctional channels)是相邻细胞之间直接进行小分子物质(分子量<1000 Da,例如,离子、代谢产物和信使分子等)交换的通道.生物体通过这种通道进行物质和信息交换,使得细胞对环境的刺激作出协调一致的反应.为了系统地比较Cx31各类致病突变在细胞内表达的差异,进一步探明各类疾病的致病机理,我们选择了11个已经鉴定的致病突变和1个非致病突变,对它们的表达定位、对Triton X-100的可溶性等性质进行了系统地分析.为了对Cx31的功能有更深入地了解,我们对野生型Cx31的转运和代谢机制进行了深入地研究.在对野生型Cx31的组装、运输及降解途径进行研究时,我们将WT-Cx31分别装入pEGFP-N1和pDNA3.1/myc-hisB(-)两个载体,用稳定表达Cx31融合蛋白的HeLa细胞进行分析.采用BFA、cytoD和NOC分别破坏内质网-高尔基体转运、肌动蛋白纤维和微管,观察这些结构破坏后荧光染料calcein在细胞间转移的变化来分析Cx31的组装和运输途径.采用特异的蛋白酶抑制剂分别抑制蛋白酶体和溶酶体活性,通过Western Blot分析抑制前后细胞内Cx31含量的变化和脉冲追踪实验分析抑制前后Cx31更新速率的变化,来研究Cx31的降解途径.
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