【摘 要】
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干扰素一直是病毒学、细胞学、分子生物学、临床医学、免疫学、肿瘤学等相关领域的研究热点.干扰素基因序列研究结果表明,该序列早在5~10亿年前就存在于生命细胞的基因序列中
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干扰素一直是病毒学、细胞学、分子生物学、临床医学、免疫学、肿瘤学等相关领域的研究热点.干扰素基因序列研究结果表明,该序列早在5~10亿年前就存在于生命细胞的基因序列中,是生物体内一种古老的保护因子.来自白细胞的IFN α主要参与抗病毒、抗肿瘤作用;而IFN γ是主要参与诱导主要组织相容性抗原(MHC)的表达和免疫调节效应.是人们普遍看好的并具有广阔应用前景的生物制剂.因此,近年来基因工程干扰素被广泛的研究.本实验也对猪的干扰素进行了初步的研究.为了获得猪α、γ-干扰素,本实验根据Gebank中猪α、γ-干扰素基因序列,设计合成了包含α和γ基因完整开放阅读框的相应引物,分别命名为α<,1>、α<,2>和γ<,1>、γ<,2>.以α<,1>、α<,2>和γ<,1>、γ<,2>为引物,以ConA诱导猪脾、猪血淋巴细胞提取的总RNA为模板,应用RT-PCR方法分别扩增出一条615bp和501bp的特异性DNA,并克隆到pMD18-T载体中,经鉴定,证明获得了包含α和γ基因完整开放阅读框的阳性重组质粒,分别命名为pMD18-α和pMD18-γ.为了获得具有生物学活性的猪α、γ干扰素,进一步开展猪α、γ干扰素的功能和应用研究,本实验又分别构建了猪α、γ干扰素基因的原核和真核表达载体,分别命名为pGFP<->-α<,1>、pGFP<->-γ<,1>和pPROEXHT-α<,2>、pPROEXHT-γ<,2>.在大肠杆菌中对猪α、γ-干扰素进行表达、SDS-PAGE可见特异性表达条带,薄层扫描分析,表达量分别占总体菌蛋白10％、12％.纯化的包涵体经SDS-PAGE检测其纯度均在90％以上.为进一步研究猪α、γ干扰素的结构、功能及其在细胞水平和分子水平的作用机制奠定了基础.
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