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目的：建立痛经康口服液质量控制标准,探讨痛经康口服液毒性、药效、药理及其相关机制,完善临床前研究资料为进一步制剂研发和临床应用奠定基础。
方法：⑴痛经康口服液质量标准研究：以丹参、元胡、红花为指标进行薄层鉴别,以丹酚酸B、延胡索乙素、羟基红花黄色素A为指标建立高效液相色谱含量测定方法；⑵痛经康口服液急性毒性研究：采用最大给药量法观察小鼠毒性反应；⑶痛经康口服液抗炎镇痛研究：采用热板法、醋酸扭体法观察痛经康口服液的镇痛作用,采用耳廓肿胀实验、毛细血管通透性实验观察痛经康口服液的抗炎作用；⑷痛经康口服液抗痛经作用及其机制研究：建立大鼠痛经模型,大鼠股部皮下注射己烯雌酚,1次/天,连续11天,其中第1天及第11天注射量为0.8μmg/只,第2天至第10天注射量为0.4mg/只。于最后1次给药40min后,所有大鼠按4U/kg腹腔注射缩宫素致大鼠扭体反应。采血,取子宫组织,采用酶联免疫吸附法、放免法、分光光度法、RT-PCR方法等方法检测大鼠血及子宫组织相关指标,探讨痛经康口服液抗痛经作用的作用机制。
结果：①通过质量标准研究我们建立了以丹参、元胡、红花为指标的薄层色谱鉴别方法,结果供试品溶液色谱在与对照药材或对照品相应位置上出现相同颜色的斑点,阴性对照无干扰。同时我们亦建立了以丹酚酸B、羟基红花黄色素A、延胡索乙素为指标的含量测定方法,结果:丹酚酸B的色谱条件为甲醇-乙腈-1.0％甲酸(31:10∶59);流速:1.0mL·min-1;检测波长286nm;柱温:25℃;进样量10μl。丹酚酸B进样量在0.1166-1.1664μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。羟基红花黄色素A色谱条件为甲醇-乙腈-0.7％磷酸(26∶2∶72)为流动相,流速1.0mL·min-1,检测波长403nm,柱温:27℃。羟基红花黄色素A进样量在0.13μg-2.6μg之间与峰面积呈良好线性关系。延胡索乙素色谱条件为流动相甲醇-0.1％磷酸溶液(三乙胺调pH值至6.0)(60∶40);流速为0.8mL·min-1;检测波长280 nm;柱温为29℃;理论板数3000,分离度大于1.5。延胡索乙素进样量在0.026mg-1.040mg之间与峰面积呈良好线性关系。②急性毒性研究:痛经康口服液在剂量为261g(生药量)/kg体重时未发现毒性反应。③抗炎镇痛研究:痛经康口服液能显著减少醋酸所致小鼠扭体次数(p＜0.01),抑制由二甲苯所致小鼠耳廓肿胀程度(p＜0.01),降低小鼠腹腔毛细血管通透性(p＜0.01),但对热刺激所致小鼠痛阈值未见明显影响(p＞0.05)。④抗痛经作用及其机制研究:正常对照组10只大鼠未见出现扭体反应,其余各给药组均出现不同程度的扭体反应。痛经康低、中、高剂量组和阿魏酸钠高、低剂量组出现扭体反应的动物数量均较模型对照组少,且呈一定剂量依赖关系。田七痛经胶囊组、痛经康中高剂量组出现扭体反应潜伏期较模型对照组延长,30min扭体反应次数较模型对照组减少,其中痛经康中剂量组与模型对照组比较扭体反应潜伏期明显延长(p＜0.01),但扭体反应次数无统计学差异。与正常组比较,模型组PGE2显著降低(P＜0.01),而PGF2a含量及PGF2a/PGE2的比值显著升高(P＜0.01)。与模型组比较痛经康中、高剂量组、田七痛经胶囊组、阿魏酸钠高、低剂量组PGE2含量均有不同程度升高(P＜0.01或P＜0.05);而痛经康中、高剂量组、田七痛经胶囊组、阿魏酸钠高、低剂量组、红花黄色素高剂量组PGF2a含量及PGF2a/PGE2的比值均有不同程度降低(P＜0.01或P＜0.05)。痛经康低、中、高剂量组可不同程度降低痛经大鼠子宫催产素及加压素受体mRNA表达(p＜0.01,p＜0.05)模型组催产素受体及加压素受体mRNA。与正常组比较,模型组雌二醇含量显著升高(P＜0.01),而孕酮含量显著下降(P＜0.01)。与模型组比较痛经康中、高剂量组雌二醇含量均显著降低(P＜0.05),而痛经康低、中、高剂量组孕酮含量显著升高,其他各组对雌孕激素的影响不明显(P＞0.05)。与正常组比较,模型组SOD活性显著降低(P＜0.01),而MDA、8-iso-PGF2a含量显著升高(P＜0.01)。与模型组比较痛经康中、高剂量组MDA、8-iso-PGF2a含量均显著降低(P＜0.01或P＜0.05),痛经康高剂量组SOD活性较模型组显著提高(P＜0.01)。与正常组比较,模型组NO显著降低(P＜0.01),而ET-1含量显著升高(P＜0.01)。与痛经康高、中、低剂量及其他药物治疗组NO含量较模型组均显著提高(P＜0.05)。痛经康高、中、低剂量组及其他药物治疗组ET-1含量均显著降低(P＜0.01或P＜0.05)。
结论：⑴薄层色谱及含量测定方法简便、稳定、专属性强、可重复性高适于痛经康口服液的质量控制。⑵痛经康口服液具有较高的安全性。⑶痛经康口服液具有明显的抗炎镇痛作用。⑷痛经康口服液具有明显的抗痛经作用。⑸痛经康口服液抗痛经作用的作用机制可能与调节性激素水平,调节前列腺素系统,调节加压素及催产素受体的表达,抗氧化应激损伤,调节NO及ET-1改善局部血液循环等方面有关。⑹阿魏酸、红花黄色素在调节前列腺素水平,改善局部血液循环,抗氧化应激损伤等方面具有一定作用但整体抗痛经作用并不明显,提示仍有其他成分参与抗痛经作用。