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研究背景：非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma，NHL)采用现代治疗方法，完全缓解率可达70-80﹪，但5年生存率仅40﹪左右。许多获得缓解的病人最终复发死亡。微小残留病灶是复发的根源。寻找NHL血清特异性小分子标志蛋白，作为微小病灶的监测和疗效判断，有助于生存率的改善。肿瘤微小残留病灶的检测是科学家们一直探索的课题。上世纪八十至九十年代，采用PCR、巢式PCR、RT-PCR和荧光定量PCR等体外扩增技术在分子水平上检测NHL微小残留病灶方面做了大量的研究，然而结果不尽人意。近年来发展SELDI蛋白芯片技术具有快速、简单、敏感、样本用量极少等优点，可能为提高目前微小残留病灶检测水平提供新的思路。
研究目的：
在NHL发病、化疗后完全缓解、复发等不同阶段，肿瘤细胞内或机体内(部分进入外周血)在蛋白质成分和数量上都会有相应的改变。所以，从理论上说，通过对蛋白质动态的观察可以筛选出NHL特异的小分子标记物。
本研究应用SELDI蛋白芯片技术，分析NHL初诊与正常人群血清蛋白质谱的差异，以及NHL化疗前后血清蛋白质谱的变化，寻找NHL血清小分子标记物，并探讨其临床应用价值。
研究方法：
1、收集了2003年2月-2006年9月间在中山大学肿瘤防治中心内科住院的初治的NHL患者共44例，男性35例，女性9例，中位年龄10岁(7月龄～56岁)。病理类型：前驱T淋巴母细胞淋巴瘤/白血病(T-LBL/ALL)17例，间变大细胞淋巴瘤(ALCL)6例，周围T细胞淋巴瘤，非特殊型(PTCL,unspecifled)1例，前驱B淋巴母细胞淋巴瘤/白血病(B-LBL/ALL)8例，弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)8例，伯基特淋巴瘤(BL)4例。所有患者在初诊治疗前均抽血标本1次，接受相应的标准化疗方案化疗获得完全缓解(complete remission，CR)后再抽血标本1次，共收集血标本88份并-80℃冷冻保存。正常51例正常人血清蛋白质谱为对照组。血清标本分成3组：NHL初诊组、正常对照组和CR组(NHL患者自身配对)。
2、采用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱分析技术(surface-enhanced laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry，SELDI-TOF-MS)对结合在弱阳离子芯片CM10上的血清蛋白质谱进行读取分析。
3、应用Ciphergen ProteinChip
软件进行原始数据的校正和分析，以Biomarker Wizard对NHL初诊组与正常对照组的蛋白质谱数据作比较和t检验，寻找两组间表达有差异的蛋白质峰。再对NHL初诊组与CR组蛋白质谱数据进行同样的处理。以Biomarker Pattern软件分析数据并建立分类树模型，构建最优模型的差异蛋白成为候选标记物。
研究结果：
1、我们在NHL初诊患者与正常对照组血清实验中发现，NHL患者血清中有54个差异蛋白(P<0.05)，其中8个差异蛋白在NHL患者血清中高表达,46个差异蛋白在NHL患者血清中低表达。
2、NHL初诊与化疗后CR组血清：上述8个在NHL血清高表达的差异蛋白有1个在化疗CR后表达下降，46个在NHL血清低表达的差异蛋白有9个在化疗CR后表达上调(P<0.05)。
3、M/Z位于11710和11672的蛋白峰是同一个差异蛋白峰的不同部分，均在NHL血清组高表达，化疗CR后表达下降，P<0.001，选为NHL的候选标记物。
4、亚组分析：亚型淋巴母细胞性淋巴瘤/白血病(lymphoblastic lymphoma/leukemia，LBL/ALL，以下简称LBL)25例(占NHL病例总数56.8﹪)，LBL初诊与正常组血清：LBL初诊血清中有52个差异蛋白(P<0.05)，其中8个差异蛋白在LBL初诊血清中高表达,44个差异蛋白在NHL初诊血清中低表达。LBL初诊与CR组血清：上述8个在LBL血清高表达的差异蛋白化疗CR后表达无明显下降，在LBL初诊血清低表达的44个差异蛋白有9个在化疗CR后表达上调(P<0.05)，这9个差异蛋白的质荷比与NHL化疗CR后上调的差异蛋白完全相同。
5．Biomarker Pattern软件从上述NHL和LBL化疗CR后上调的9个血清差异蛋白中自动选取几个鉴别意义最大的候选标记物建立NHL分类树模型和LBL分类树模型。NHL分类树模型(M8581、M15149、M6646和M8918)可将NHL初诊和正常对照的血请正确分组，敏感性为93.3﹪，特异性为100﹪，构建模型的蛋白峰选为NHL候选标记物。LBL分类树模型(M6646、M15149和M8708)可将LBL组和正常组血清正确区分，敏感性和特异性均为96﹪，构建模型的蛋白峰选为LBL候选标记物。
研究结论：
1．本研究发现非霍奇金淋巴瘤患者血清存在有6个候选标记蛋白，它们是M11710(NHL高表达)、M11672(NHL高表达)、M8581(NHL低表达)、M15149(NHL低表达)、M6646(NHL低表达)和M8918(NHL低表达)。
2．本研究发现淋巴母细胞淋巴瘤患者血清存在有3个候选标记蛋白，它们是M6646、M15 149和M8708，都在LBL组低表达。
3．应用SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术筛选出NHL患者血清中的标志蛋白，可能在非霍奇金淋巴瘤微小残留病灶监测、早期复发预测、疗效判断等方面提供有用的信息。