规模化猪场大肠杆菌、沙门氏菌耐药性检测与分析

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大肠杆菌(Escherichiacoli)和沙门氏菌(Salmonella)是重要的人畜共患病病原菌,大肠杆菌、沙门氏菌的耐药性是近年来研究的热点。本文在分离鉴定猪源大肠杆菌和沙门氏菌的基础上,进行了分离菌株的耐药性及其耐药相关基因的分析。 经生化试验,从规模化猪场粪便样本中鉴定出136株大肠杆菌和62株沙门氏菌。大肠杆菌O单因子抗血清和沙门氏菌A~F群抗血清对分离菌株的鉴定结果表明,定型大肠杆菌76株,分属12种血清型,占分离菌株的55.9%,其中O141、O18、O107、O20和O131为优势血清型,占定型菌株的76.3%;鉴定出的沙门氏菌有19株属于A~F群,占分离菌株的30.6%。 用PCR法检测了E.coli的肠毒素基因,结果表明有38株阳性菌株,占所有大肠杆菌分离株的27.9%,其中含st1的26株,占19.1%。就季节分布来看,春季阳性菌株最多,有28株,占该季分离株的37.3%。 采用微量肉汤稀释法分析了大肠杆菌、沙门氏菌分离株对20种抗生素的耐药性。结果表明,绝大多数分离株为多重耐药菌。大肠杆菌最少同时耐4种抗生素,占分离株的2.2%;最多同时耐18种抗生素,占0.7%;同时耐10种以上抗生素的菌株占62.5%。沙门氏菌最少同时耐2种抗生素,占分离株的1.6%;最多同时耐18种抗生素,占3.2%;同时耐10种以上抗生素的菌株占61.3%。土霉素、四环素、磺胺嘧啶、金霉素、强力霉素和阿莫西林的耐药率依次99.0%,99.0%,98%,92.4%,89.4%和87.9%。所有分离株都对头孢曲松敏感。对6种喹诺酮类抗生素的耐药率为二氟沙星69.2%,沙拉沙星43.4%,环丙沙星37.9%,恩诺沙星34.8%,氧氟沙星32.8%,诺氟沙星31.8%。 采用PCR法扩增了36株不同喹诺酮类抗生素耐药水平的大肠杆菌和沙门氏菌的DNA旋转异构酶gyrA喹诺酮抗性决定区(QRDR)和所有菌株的1型整合子。测序结果表明,敏感菌株QRDR没有基因突变,低水平喹诺酮药物耐药菌株发生83或87位密码子突变,高水平喹诺酮药物耐药菌株两个位点同时发生突变。在136株大肠杆菌和62株沙门氏菌中,有42株大肠杆菌和32株沙门氏菌有1型整合子,分别占分离菌株的30.9%和51.6%。序列分析结果表明1型整合子中没有喹诺酮耐药基因qnr。
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