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目的： 通过体内和体外实验，体外实验运用消痰散结方中药血清干预MKN-45人胃癌细胞，检测其对胃癌细胞增殖、侵袭、迁移能力及凋亡的影响，通过其对人胃癌细胞微卫星不稳定性的作用，进一步检测胃癌细胞中与微卫星不稳定密切相关的错配修复蛋白hMLHl及二次突变相关蛋白转化生长因子-βⅡ型受体（TGF-βRⅡ）、胰岛素样生长因子Ⅱ型受体（IGFⅡR）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）的表达水平；体内实验运用消痰散结方干预MKN-45人胃癌裸鼠原位移植荷瘤鼠，测量中药消痰散结方对MKN-45人胃癌裸鼠原位移植瘤生长的影响，检测消痰散结方对人胃癌裸鼠原位移植瘤微卫星不稳定性的作用，分析消痰散结方干预后对MKN-45人胃癌微卫星不稳定密切相关的错配修复蛋白hMLHl及二次突变相关蛋白TGF-βRⅡ、IGFⅡR和Bax的表达水平的影响。明确消痰散结方对胃癌微卫星不稳定的干预效果，探讨中药消痰散结方发挥此作用的可能机理，深入探讨消痰散结方从痰论治胃癌作用机制。 方法： （一）体外实验 1、消痰散结方对MKN-45人胃癌细胞相关生物学特性的影响: （1）制备消痰散结方中药血清、空白对照血清、空白药物血清及替加氟血清。 （2）消痰散结方中药血清干预MKN-45人胃癌细胞，通过透射电镜观察消痰散结方中药血清对胃癌细胞超微结构的作用；CCK-8法观察消痰散结方中药血清对胃癌细胞增殖能力变化的影响；划痕修复实验观察胃癌细胞迁移能力的变化；Transwell方法检测胃癌细胞侵袭能力的变化。 2、消痰散结方对MKN-45人胃癌细胞微卫星不稳定的作用: 消痰散结方中药血清干预MKN-45人胃癌细胞，STR Genotyping方法检测消痰散结方中药血清对MKN-45人胃癌细胞微卫星不稳定性的影响，Westenblot方法检测错配修复蛋白hMLHl及二次突变相关蛋白TGF-βRⅡ、IGFⅡR和Bax的表达水平。 （二）体内实验 消痰散结方对MKN-45人胃癌裸鼠原位移植瘤微卫星不稳定的作用: 建立MKN-45人胃癌原位移植模型，随机分为空白对照组、生理盐水组、消痰散结方组及替加氟组；模型建立后48h，持续6周荷瘤鼠灌胃给药，0.4ml/次/日，6次/周；观察荷瘤鼠形态及体重变化（每周称重一次）；实验结束时，处死荷瘤鼠，称取瘤重，计算抑瘤率；透射电镜观察消痰散结方对胃癌组织超微结构的变化。STR Genotyping方法检测消痰散结方对胃癌组织微卫星不稳定的影响；Westenblot方法检测错配修复蛋白hMLHl及二次突变相关蛋白TGF-βRⅡ、IGFⅡR和Bax的表达水平。 结果： （一）体外实验结果 1、消痰散结方对MKN-45人胃癌细胞相关生物学特性的影响: （1）消痰散结方中药血清对MKN-45人胃癌细胞超微结构的影响： 在消痰散结方中药血清作用MKN-45人胃癌细胞48h后观察发现，空白对照组及空白药物血清组肿瘤细胞膜完整，细胞核、线粒体、内质网形态基本正常。 （2）消痰散结方中药血清对MKN-45人胃癌细胞增殖的影响： 消痰散结方中药血清作用人胃癌MKN-45细胞48h时，经单因素方差分析，四组的OD值差异具有统计学意义（P=0.000）。进一步两两分析，消痰散结方血清组与空白对照组、空白药物血清组OD值差异均具有统计学意义（P=0.029，P=0.022）。替加氟血清组与空白对照组、空白药物血清组OD值差异均具有统计学意义（P=0.000，P=0.000）。 （3）消痰散结方中药血清对MKN-45人胃癌细胞侵袭的影响： 消痰散结方中药血清作用MKN-45人胃癌细胞24h时观察发现，与空白药物血清组相比，消痰散结方血清组干预后穿过Matrigel基质膜的MKN-45细胞数明显减少，差异有统计学意义（P=0.018）；替加氟血清组干预后穿过Matrigel基质膜的MKN-45细胞数减少，差异无统计学意义（P>0.05）。提示消痰散结方血清及替加氟血清均可抑制MKN-45胃癌细胞的侵袭能力，消痰散结方血清在24h时对胃癌细胞侵袭能力的抑制作用较强，而替加氟血清在48h时对胃癌细胞侵袭能力的抑制作用较强。 （4）消痰散结方中药血清对MKN-45人胃癌细胞迁移的影响： 消痰散结方中药血清作用MKN-45人胃癌细胞24h时，空白药物血清组中MKN-45细胞的迁移速度最快，消痰散结方血清组及替加氟血清组干预的MKN-45细胞迁移速度较慢，提示消痰散结方血清及替加氟血清可以抑制MKN-45胃癌细胞的迁移能力。 2、消痰散结方对MKN-45人胃癌细胞微卫星不稳定的作用: （1）消痰散结方中药血清对MKN-45人胃癌细胞微卫星位点的影响： 消痰散结方中药血清作用MKN-45人胃癌细胞48h后经检测发现，在空白药物血清组中，五个微卫星位点（Bat-25、Bat-26、D2S123、D5S346、D17S250）其中的D2S123、D5S346出现短串重复序列的某些延长和缩短，Bat-25、Bat-26、D17S250则无延长或缩短。而在消痰散结方血清组及替加氟血清组中D2S123、D5S34携带短串重复序列的基因的变异出现稳定趋势，提示消痰散结方血清干预后，可以使不稳定的短串重复序列趋于稳定，对人胃癌MKN-45细胞微卫星不稳定有抑制作用。 （2）消痰散结方中药血清对MKN-45人胃癌细胞微卫星相关蛋白Westenblot检测结果： 消痰散结方中药血清及替加氟血清干预MKN-45人胃癌细胞后，错配修复蛋白hMLHl及二次突变相关蛋白TGF-βRⅡ、IGFⅡR和Bax的表达水平明显增加。提示消痰散结方血清可以上调MKN-45细胞错配修复蛋白hMLHl及二次突变相关蛋白TGF-βRⅡ、IGFⅡR和Bax的蛋白表达。 （二）体内实验结果 消痰散结方对MKN-45人胃癌裸鼠原位移植瘤微卫星不稳定的作用: （1）消痰散结方对MKN-45人胃癌裸鼠原位移植瘤生长的抑制作用： 干预6周实验结束时，称取瘤重，经两两比较，消痰散结方组与替加氟组组间差异无统计学意义（P＞0.05）；消痰散结方组与空白对照组、生理盐水组组间比较，瘤重明显减小，差异有统计学意义（P<0.05）；替加氟组与空白对照组、生理盐水对照组组间比较，瘤重明显减小，差异有统计学意义（P<0.05）。消痰散结方组抑瘤率为46.2％，替加氟组抑瘤率为47.3%。 （2）消痰散结方对MKN-45胃癌荷瘤鼠肿瘤组织超微结构的影响： 空白对照组及生理盐水组肿瘤细胞膜完整，细胞核、线粒体、内质网形态基本正常。消痰散结方组肿瘤细胞细胞膜不连贯，细胞核出现固缩，染色体异染色质聚集，线粒体嵴机构消失结构被破坏损伤，内质网扩张，胞质内大量空泡化，细胞呈凋亡状态。替加氟组细胞胞质内出现巨大空泡，细胞核固缩，线粒体结构消失，内质网扩张，呈凋亡状态。 （3）消痰散结方对MKN-45人胃癌裸鼠原位移植瘤微卫星位点的影响： 在空白对照组中，五个微卫星位点（Bat-25、Bat-26、D2S123、D5S346、D17S250）其中的D2S123、D5S346出现短串重复序列的某些延长和缩短，Bat-25、Bat-26、D17S250则无延长或缩短。而在消痰散结方组、替加氟组中D2S123、D5S34携带短串重复序列的基因变异出现稳定趋势，提示消痰散结方干预后，可以使不稳定的短串重复序列趋于稳定，对人胃癌MKN-45细胞微卫星不稳定有抑制作用。 （4）消痰散结方对MKN-45人胃癌裸鼠原位移植瘤微卫星相关蛋白Westenblot检测结果： 消痰散结方及替加氟干预人胃癌裸鼠原位移植瘤后，错配修复蛋白hMLHl的表达水平明显增强，二次突变相关蛋白TGF-βRⅡ、IGFⅡR和Bax的表达水平未见明显增强。提示消痰散结方可以上调错配修复蛋白hMLHl的表达水平。 结论： 通过以上体外细胞实验、体内荷瘤鼠实验研究，我们认为： 1、消痰散结方具有抑制胃癌增殖、生长、迁移和侵袭能力的作用： （1）消痰散结方中药血清可以抑制MKN-45人胃癌细胞的增殖、侵袭、迁移能力； （2）消痰散结方可以抑制MKN-45人胃癌裸鼠原位移植瘤的生长； （3）消痰散结方及其中药血清抑制胃癌增殖、生长、迁移和侵袭能力是通过破坏胃癌细胞胞质，增加核固缩，破坏线粒体结构，扩张内质网，诱导细胞呈现凋亡状态等效应发挥作用。 2、消痰散结方及其中药血清可以抑制MKN-45人胃癌细胞及MKN-45人胃癌裸鼠原位移植瘤的微卫星不稳定性，使其处于微卫星稳定状态。 3、消痰散结方抑制胃癌微卫星不稳定性的作用机制如下： （1）消痰散结方及其中药血清可以上调MKN-45人胃癌细胞及MKN-45人胃癌裸鼠原位移植瘤中错配修复蛋白hMLHl的表达水平； （2）消痰散结方中药血清可以上调MKN-45人胃癌细胞中二次突变相关蛋白TGF-βRⅡ、IGFⅡR和Bax的表达水平。