博尔纳病病毒感染及其主要基因/蛋白对神经干细胞增殖与分化的影响

• 作 者: 答嵘
• 机 构: 哈尔滨医科大学
• 出 处: 哈尔滨医科大学
• 发表日期: 2008年期
• 关键词: 博尔纳病毒 脑内感染 细胞增殖 蛋白表达

目的：博尔纳病病毒(BDV)是单负链RNA病毒目、博尔纳病病毒科的原型病毒。通过研究BDV感染与其主要基因/蛋白对体外培养神经干细胞(NSCs)增殖和分化的影响,探讨BDV通过干预NSCs的生物学行为参与致病的机制。
方法：本研究对脑内感染的新生大鼠海马组织进行连续切片,采用免疫组化方法检测BDV的P40蛋白与增殖细胞的标志物Ki-67。同时,分别以MOI为4、1、0.2的BDV接种原代培养的新生大鼠NSCs,采用RT-nested PCR和Western blot检测感染6d时BDV基因与蛋白的表达水平。本研究中分别通过BDV以MOI为0.5感染,与应用携带增强型绿色荧光蛋白报告基因的BDV基因哺乳动物表达载体以脂质体转染原代分离新生大鼠海马NSCs,采用间接免疫荧光、MTT试验、BrdU摄入试验探讨了BDV感染时次代神经球的数量和大小、细胞总数、球内增殖,并分析诱导分化后的次代神经球贴壁分化率、分化速度、分化为神经元和星形胶质细胞的比例。
结果：①新生大鼠脑内感染BDV后海马组织连续切片中Ki-67阳性细胞中有部分BDV P40蛋白染色阳性：②随病毒MOI升高,原代培养新生大鼠海马NSCs中BDV核酸与蛋白表达增高；⑨BDV感染后,次代神经球数量不变,但直径较小,细胞总数减少,球内增殖率从正常70％降至50％；④BDV感染后,次代神经球的贴壁分化率降低,分化速度减慢,分化细胞中神经元与星形胶质细胞的比例无明显变化；⑤BDV基因哺乳动物表达载体能够在NSCs中表达BDV蛋白,其表达定位与BDV感染其它细胞时相同；⑥BDV基因表达的NSCs球内增殖率无明显变化；⑦BDV基因表达的分化细胞中神经元与星形胶质细胞的比例较正常分化细胞无明显差异。
结论：以上结果表明BDV在体内和体外均能够感染大鼠海马NSCs。BDV感染对体外培养的NSCs增殖与分化具有抑制作用,但对分化细胞中神经元与星形胶质细胞的比例无明显影响。本研究发现提示博尔纳病病毒及其感染可能通过干预NSCs的生物学行为参与致病过程,并可能是病毒多个基因联合作用所致。