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戊型肝炎病毒(hepatitis E virus，HEV)是近年来发现的一种传染性很强的新型病毒，戊型肝炎病毒导致的戊型肝炎已经被确定为人畜共患病，戊型肝炎可引起黄疸、肝硬化等症状，随着人们对戊型肝炎研究的深入研究，人们发现戊型肝炎在全球的感染率呈上升趋势。因此研究戊型肝炎病毒，建立一个快速诊断戊型肝炎病毒的方法具有重要意义。 戊型肝炎病毒含有3个开放阅读框(ORF)，ORF1，ORF2和ORF3，其中ORF2编码含660个氨基酸的衣壳蛋白，该蛋白含有病毒颗粒的主要表位，并被普遍用作检测HEV抗体的抗原。在前期实验中，本课题组针对先前已发表的HEV衣壳蛋白抗原表位，设计了两对引物分别扩增该区域的基因片段BH、BW、BZ、BE，并通过原核表达体系表达出两段融合蛋白。通过Western-blot检测后发现HEV-BW融合蛋白可以与HEV毒株发生反应，而HEV-BH融合蛋白不与HEV毒株发生反应。进一步说明了，HEV的天然免疫优势表位位于融合蛋白HEV-BW(398～619aa)之间，而HEV-BH融合蛋白(290～405aa)不存在天然免疫优势表位。融合蛋白HEV-BW具有良好的抗原性，可以作为诊断用的融合蛋白。 研究一利用纯化的融合蛋白HEV-BW进行动物免疫，采用腹腔注射，四免后取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合，然后筛选，选出阳性孔，亚克隆4次后，最终得到5株抗猪HEV的单克隆抗体3E5，7A1，7C5，6G3，2F4，然后通过亚型鉴定，证明这5株单克隆抗体都是IgG1亚型。Wersten-blot实验鉴定结果显示5株单抗均可以特异性识别HEV，而且5株单抗与猪繁殖与呼吸综合症病毒、猪圆环病毒和猪瘟病毒均无交叉反应，证明该单抗针对HEV具有良好的特异性。 研究二利用制备的单克隆抗体经过抗体配对实验，选出两株最佳配对抗体，包被抗体7C5与酶标抗体6G3，建立了检测猪戊型肝炎病毒的双抗体夹心ELISA检测方法，并对工作条件进行了优化，最终确定:包被抗体的最佳稀释倍数为1∶50、酶标抗体的最佳稀释倍数为1∶10000、最佳封闭液为10％的小牛血清，抗原抗体最佳反应时间为60分钟。在敏感性实验中，用本ELISA检测方法和商品试剂盒一同检测本实验室保存的53份猪HEV毒株，结果表明商品试剂盒的检出率为86.8％，双抗体夹心ELISA方法的检出率为92.5％，证明该检测方法具有很高的敏感性。在特异性实验中，本双抗体夹心ELISA检测方法与猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒和猪瘟病毒、猪圆环病毒均无反应，只与HEV呈阳性反应，表明本ELISA方法针列HEV具有很高的特异性，以上实验结果表明，本研究建立的双抗体夹心ELISA检测方法敏感性强、特异性良好，适用于临床样本中HEV的快速检测，为以后大规模的流行病学调查提供了检测方法。