花椒再生体系的建立及ipt基因遗传转化研究

来源 :贵州大学 | 被引量 : 8次 | 上传用户:hudan913000
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本研究以朝仓花椒为研究对象,建立组培再生体系,并在此基础上,首次利用农杆菌介导法将细胞分裂素生物合成限速酶一异戊烯基转移酶基因(ipt)导入花椒体内,探索花椒遗传转化的技术参数,初步建立了花椒遗传转化体系,为利用基因工程技术对花椒进行遗传改良打下基础。其主要研究内容如下: 1.花椒再生体系建立试验 以花椒萌发生长5-20d的无菌苗叶柄、茎段及叶片为外植体,研究在以WPM培养基为基本培养基中附加不同的浓度的细胞分裂素(6-BA)和生长素(NAA、IBA),对朝仓花椒愈伤组织诱导及再生的影响,建立了朝仓花椒植株再生体系。结果表明:愈伤组织诱导及分化最适培养基为WPM+6-BA0.5mg·L-1+NAA0.2mg·L-1,最适生根培养基为1/2WPM不添加任何激素,移栽时,以珍珠岩和田土1:3比例成活率最高,28d后统计成活率可达85.6%。 2.农杆菌介导的朝仓花椒遗传转化体系建立 建立了以朝仓花椒叶柄及茎段为转化受体的根癌农杆菌遗传转化体系,初步确定了抗生素卡那霉素(kan)的筛选浓度,在遗传转化过程中,详细探讨了外植体预培养时间、浸染菌液浓度、浸染时间、共培养时间等影响因素对转化效率的影响。结果表明:外植体预培养3d,菌液浓度在OD值0.5-0.7,浸染10min,共培养3d为最佳技术参数;延迟7d筛选可提高转化效率,重悬液及共培养基中添加100μmol·L-1AS可提高转化率至24.6%。 3.转化植株检测 通过农杆菌介导法遗传转化朝仓花椒,并对转化植株进行GUS组织活性及PCR检测。结果表明部分转化植株GUS染色显蓝色,部分植株PCR检测呈阳性,初步证实目的基因已转入花椒基因组中。 ipt基因表达有效促进了朝仓花椒遗传转化过程中不定芽的诱导,转ipt基因花椒能产生大量分枝,易于增殖培养,但转基因植株生根受到抑制。
其他文献
本文从摄影的角度去理解中国传统美学在摄影上的显现.通过分析中国传统美学中的"整体意识"与大学摄影教学实践的"接地气"、传统美学中的人文导向与本土的民风民俗、传统美学
本文受1999年10月版的《中国摄影》刊登的编辑部文章《1949-1999摄影在我们的记忆中》启发,分析了什么是艺术经典、经典摄影作品创作的必要条件,以及经典化过程中重要的因素:
以人民为中心是新时期文艺工作必须紧紧围绕的导向.群众性摄影活动作为摄影艺术的一个重要维度,对其进行研究探索,可以为更好地体现摄影艺术的群众性,发挥好摄影引领风尚、教
传播环境中自觉地凸显摄影的精神与摄影的特征和优势,设计营造具有自身特色的优良环境,使其发挥积极的正面效用。在这个科技急速发展、财富迅速累积、物质相对富足、思维不断刷
摄影同质化现象,是当下国内全民摄影时代的一大弊病,这种现象如果不彻底纠正,将会阻碍中国未来摄影的健康发展.为了改变这种现象,摄影者需要明确自己的摄影方向,更新摄影观念
目前,各商业图片库仍然采用“闭关锁国”的竞争模式:注册要经过严格审核:没有账户的浏览者不能查看图库内容。建立一个图片库的联合搜索引擎,即通用交易平台,图片编辑只要在这个平
作者單位:江蘇省高邮第二中学 225600)
肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC;以下简称肝癌)是全球发病率排第五的肿瘤,由于其高转移复发率,HCC患者的预后往往很差。遗传或表观遗传改变导致的癌基因活化和抑癌基因失
摘要:多维评价方式在实际英语教学中,是一种采取教师评价、学生自评、学生互评相结合的多元主体评价形式。评价内容不仅包括语言知识水平,还包括外语交际能力,兴趣、策略、态度等方面在学习过程中的形成和改进。评价方式以问卷访谈、自我或相互评价、学习档案、教师日常记录等为主,以测验、考试等为辅。通过实施多维评价方式发现,以形成性评价为主的多维评价体系为教师提供了更全面的反映学生学习能力和表现的评价方式,对课堂
以锯缘青蟹(Scylla serrata)内表皮为材料,经过含0.2 mol/L NaCl的10 mmol/LTris-HCl(pH 7.5)缓冲液匀浆抽提处理,硫酸铵分级盐析纯化,获得粗酶。粗酶再经过SephadexG-100凝胶层