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肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC；以下简称肝癌）是全球发病率排第五的肿瘤，由于其高转移复发率，HCC患者的预后往往很差。遗传或表观遗传改变导致的癌基因活化和抑癌基因失活是HCC发生的关键因素。以往的研究表明，肿瘤相关基因如抑癌基因p53、RB和癌基因CTNNB1等的改变与 HCC的复发转移有关。然而，近年来的基因表达谱芯片和外显子测序芯片结果显示，在HCC的发生发展过程中还有大量肿瘤相关基因和通路发生了改变。 Calcineurin（CaN）內源性调控分子RCAN1（regulator of calcineurin1）在唐氏综合症、阿尔茨海默氏症及心脏肥大等病理过程中发挥重要作用。近期，RCAN1被发现还参与内皮细胞响应VEGF介导的血管生成信号。至今，关于RCAN1在HCC中的作用还未有研究报道。本课题组前期的研究工作对14例肝癌病人的癌组织及配对癌旁组织做了Affimatrix表达谱芯片，分析结果显示RCAN1在肝癌组织显著表达下调。基于此结果，在本文的第一部分研究中，我们首先对肝癌组织及配对癌旁组织检测了RCAN1三种选择剪接体的表达变化，发现剪接体RCAN1.4在肝癌组织中表达显著下调。通过对肝癌组织芯片（n=196）做免疫组化检测，分析发现RCAN1的低表达与肝癌患者的预后不良显著相关。在体外功能实验中，发现过表达RCAN1.4可抑制肝癌细胞的增殖、运动和侵袭能力，而干扰RCAN1.4则促进肝癌细胞的增殖、运动和侵袭。在进一步的体内实验中，证实了RCAN1.4具有抑制肝癌转移的功能。接着，采用特异性siRNA进行干扰实验，发现RCAN1.4通过调控CaN/NFAT1通路参与HCC的运动和侵袭过程。在深入的机制研究中发现，RCAN1.4可能通过调节IGF-1的自分泌影响IGF-IR/ERK/MAPK/MMP-9信号通路；同时，RCAN1.4还可能通过调节VEGF的旁分泌影响HUVEC的迁移过程；此外，肝癌临床样本中RCAN1的表达分别与NFAT1、IGF-1和MVD具有负相关性。在临床预后分析中发现，联合RCAN1和IGF-1具有更高的肝癌预后评估价值。以上结果有望为抗肿瘤和抗血管生成治疗肝癌转移提供潜在靶点。 Clusterin（CLU）是一种压力诱导的分子伴侣，而kynurenine3-monooxygenase（KMO）是色氨酸犬尿氨酸代谢途径中的一种关键酶。在本文的第二部分研究中，我们研究了CLU和KMO在肝癌中的功能和预后价值。在针对CLU的研究中，发现CLU在肝癌中的高表达与肝癌患者的低生存率和高复发率相关。体内和体外实验发现干扰CLU可抑制肝癌的侵袭转移，而过表达CLU则促进肝癌的侵袭转移。在体内转移模型中，发现CLU分子靶向药物OGX-011同样可以抑制肝癌的转移。这些结果表明CLU分子靶向药物OGX-011有望成为治疗肝癌转移的新药。在针对KMO的研究中，发现KMO在肝癌中显著表达上调且与肝癌患者的低生存率和高复发率相关。体外功能实验显示，KMO可以影响肝癌细胞的增殖、运动和侵袭。这些结果提示，KMO起到促进肝癌进展的作用并有望成为新的肝癌预后指标。 综上所述，本文发现RCAN1.4在肝癌中起抑癌作用，而CLU和KMO起促癌作用。本文不仅通过体内体外实验证实了它们在肝癌发展中的抑癌或促癌功能，还通过临床组织芯片分析评估了RCAN1、CLU和KMO在肝癌中的预后价值。我们的这些研究将为肝癌治疗提供实验依据。