脐孢木霉菌中木霉素合成相关的基因功能研究

来源 :中国计量学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liuhongyu1984
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
木霉菌(Trichodermaspp.)在自然界中广泛存在,并被人们所大量研究。木霉菌通过拮抗作用、竞争作用以及重寄生作用等,对常见的多种病原真菌能够产生抑制效果,具有良好的生防应用前景。本研究在前期工作中从大蒜中分离筛选获得一株产木霉素(单端孢霉烯类化合物的一种)的内生真菌0248,后经形态、生理生化和分子序列分析鉴定为脐孢木霉菌(T.brevicompactum)0248。在优化脐孢木霉菌产木霉素的过程中,我们采用了8种不同碳氮源组合的培养基分别进行培养。结果表明,有两种培养基中脐孢木霉生长状况接近,但木霉素的产量差异明显。根据这一结果,我们对不同产素状态下的脐孢木霉进行了转录组和数字基因表达谱测序分析,根据测序结果筛选出tri5基因和Unigene8037两个目的基因,通过PCR克隆得到目的基因片段,并运用实时荧光定量PCR技术对这两个基因进行相对表达量的差异分析。同时采用RNAi技术,降低tri5基因的表达量,观察检测脐孢木霉转化菌生理生化、木霉素产量以及tri5基因表达量等的变化,进一步验证tri5基因的功能。实验结果表明在相同培养时间下,tri5基因和Unigene8037在不同产素状态间的表达量差异显著。在培养96h时tri5基因在两种培养基中均达到最大值,其中产素状态下的表达量是不产素状态下的107.18倍。通过检测产素培养基中tri5基因表达量与木霉素含量的变化,结果显示单位质量的菌丝体产木霉素的量随着tri5基因表达量的增加而不断增加,在培养96h时达到最大值31.25mg·g-1。Unigene8037的表达量在两种培养基中均随着培养时间的增加呈现上升趋势,产素培养基B中Unigene8037的表达量最大值为不产素培养基A中最大值的8.73倍。推测tri5基因和Unigene8037的表达与木霉素合成相关。利用试剂盒体外合成dsRNA,电击转化转染dsRNA进入脐孢木霉细胞内,并采用表型观察、实时荧光定量PCR检测tri5基因表达量的变化以及气相色谱法检测发酵液中木霉素的含量等多种检测方法,验证脐孢木霉菌中tri5基因的功能。实验结果显示,在电击条件为800V时,实验组与对照组的脐孢木霉菌相比,菌丝形态发生变化最为明显,单位质量菌丝体产木霉素的量下降幅度最大,从对照组的40.22mg·g-1下降为27.07mg·g-1;tri5基因表达量为对照的0.25。进一步验证了tri5基因在木霉素合成途径中具有重要作用。
其他文献
在植物长期进化过程中,MAPK信号级联途径(Mitogen-activated protein kinasepathway)在将细胞外信号刺激转导至细胞内从而引起相应的生理生化反应的过程中起着重要的枢纽作用
  在金属离子的配位诱导作用下,有机氮杂芳环二硫醚配体可以发生多样化的原位反应(比如原位 S-S键断裂,原位 C-S 键甚至 C-N 键断裂等),这一特点不仅有利于发现新型的有机
会议
  氮氧自由基是可以构筑具有潜在应用价值的磁性材料的一种有机配体1,2,在这里我们合成了一个新的一维铜的氮氧自由基化合物[Cu3(hfac)6(NITBzald)2]n1(hfac = 1,1,1,5,5,5
会议
  在分子基磁性材料研究领域,分子纳米磁性材料单分子磁体(SMM)和单链磁体(SCM)在信息密度存储、量子计算等方面具有巨大的潜在应用价值[1-2]。相对于多核的单分子磁体,基
  近年来,配位聚合物由于其在催化、吸附、光、电、磁材料等方面的潜在应用而受到人们的广泛关注.通过水热法合成了一个基于还原希夫碱配体的锌配位聚合物,即[Zn2((OOC)2C6
会议
  含磷自由基可作为自由基链式反应的链载体和生物分子的自旋标记物.但是,绝大多数含磷自由基非常活泼,仅在溶液中检测到[1].中性P4或P2N2环状化合物已作为构筑单元,用于合成
会议
  二氧化锰因其资源丰富、成本低、具有良好的电容量及对环境友好等特点,是目前研究最多的超级电容器电极材料之一[1]。研究结果表明,二氧化锰作为储能电极材料的电化学性
会议
  纳米磁性材料由于受到信息技术中高密度磁存储设备和量子计算机快速增长的影响,引起了科学工作者的广泛兴趣[1,2]。在此研究中,我们用 2-吡啶甲醛与 Gd(NO3)3·6H2O 反应
  本文合成了一种新结构的有机-无机杂化化合物单质子化的高哌嗪高氯酸盐(1),对其进行了单晶结构,红外,元素分析,DSC以及变温介电性能测试.化合物1结晶于正交晶体Pbca空间
草酸脱羧酶能催化草酸分解产生甲酸和二氧化碳,主要用于降解造纸废水中的草酸垢、生物检测草酸、临床诊断等方面。目前该酶的低产量限制了酶的推广应用。草酸脱羧酶产量较低的一个重要原因是彩绒革盖菌发酵罐培养生物量较低。为了提高该酶的产量,本文首先从提高彩绒革盖菌发酵罐培养的生物量入手,利用不同类型的搅拌桨降低发酵过程中剪切力对彩绒革盖菌生长的影响,提高菌丝体的生物量,进而提高草酸脱羧酶的产量;在得到较高的菌