【摘 要】
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该研究通过对病原菌及其近似种的16S rDNA的序列分析,针对其特异性位点设计了16S巢式PCR(nPCR),使检测灵敏度在DNA水平上达到10ng,检测纯培养细菌和人工污染的玉米种子都达到
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该研究通过对病原菌及其近似种的16S rDNA的序列分析,针对其特异性位点设计了16S巢式PCR(nPCR),使检测灵敏度在DNA水平上达到10<-3>ng,检测纯培养细菌和人工污染的玉米种子都达到2 CFU的水平.通过对Pantoea属的玉米细菌性枯萎病菌近似种在产生群体效应的AHL信号分子上的差异,该研究设计了以esaI基因为目的片段的PCR,能有效的用单一PCR的方法区分该病菌及其近似种.这两种PCR方法可以在检测该病菌时结合使用,互相印证,将减少可能出现的假阳性及假阴性反应.为了进一步达到区分病原菌与其非致病亚种,该研究定量分析了这两个亚种之间在产生胞外多糖(EPS)上的差异,并用点杂交的方法克隆了编码EPS合成基因族cps中的cpsDEFG基因,序列分析结果显示,cpsDFG是该病菌特有的,而其中的cpsD尚未发现已知的保守结构域,因此针对这一特异片段设的cpsD-PCR,能特异性区别该病菌与其非致病亚种,这一方法尚未见报道.该研究建立了一套以PCR为基础的区别玉米细菌性枯萎病菌及其近似种和近似亚种的检测方法,其中16S nPCR的检测灵敏度比先前所报道的其它PCR方法更高,并且可以直接用以对玉米种子的检测;cpsD-PCR则能够区别该病原菌及其非致病亚种,目前尚未见有报道.对这两个亚种在蛋白质表达方面的差异进行研究和探讨,首先揭示了两者在siderphore-based铁代谢的DNA水平上的差异,为区别两个亚种建立了新的分子标记;而hrpⅢ的分泌蛋白和分泌系统的组成蛋白以及鞭毛蛋白转录水平上的表达差异,为研究该病原菌的寄主专化性和致病机理奠定了一定的基础;同时该研究还首次在该病原菌中克隆了foxR,flhA和talB基因,这些基因将为揭示更多与致病性相关的基因族提供线索.
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