【摘 要】
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血小板减少症是临床上一个突出的问题，而近年来随着化疗和放疗处理的癌症病人和骨髓移植病人的大量增加，出现血小板缺乏症的病人急剧增加。然而，目前还没有理想的治疗血小板减少
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血小板减少症是临床上一个突出的问题，而近年来随着化疗和放疗处理的癌症病人和骨髓移植病人的大量增加，出现血小板缺乏症的病人急剧增加。然而，目前还没有理想的治疗血小板减少症的药物，所以很多国家都致力开发一种更有效的治疗血小板减少症的药物。与血小板生成素受体(Thrombopoietin Receptor，Mpl)胞外区(Mpl-EC)结合的多肽或化合物可刺激血小板生成，这一点使人们认识到Mpl的新配体可以成为筛选新药的突破点。
Mpl属于造血因子受体超家族，其胞外区由两个细胞因子受体组件(CytokineReceptor Module，CRM)构成，各细胞因子受体组件又分别由两个相对独立的结构域构成。本文以设计引物扩增了c-Mpl-EC基因。为了能使表达的蛋白有更加正确结构和较高可溶性，构建了基因与泛素类蛋白SUMO的融合表达载体。在大肠杆菌中成功获得了可溶性表达的c-Mpl-EC蛋白，并将其纯化，进行Western Blot鉴定。受体是当前药物研究的核心，受体是药物结合的靶，细胞因子的生物学效应通过其特异性膜结合受体介导。本实验为进一步研究细胞因子受体，阐明细胞因子作用的机制，研究和开发细胞因子的类似物或拮抗剂用于临床应用打下了基础。
为了进一步寻找研究治疗血小板减少症的有效药物，本实验室前期研究中，发现并证明人核迁移蛋白(hNUDC)为Mpl的另一枚配体。NUDC首先是在丝状真菌Aspergillus nidulans中作为调控核迁移的nud基因发现的，A．nidulansNuDC基因在人中的同源物(hNUDC)已被克隆。hNUDC是一种在多种细胞中与微管动力中心结合并且相互作用的多功能蛋白。本实验设计引物扩增了hNUDC基因，并构建了该基因与分子伴侣SUMO的融合表达的载体，在大肠杆菌中成功表达了可溶性的hNUDC蛋白，将其纯化。本实验室的前期研表明，hNUDC与Mpl-EC结合的活性中心为hNUDC中一段400bp的片段，将此段基因克隆构建到酵母表达载体中，并在毕赤酵母表达系统中表达，得到了分泌表达的hNUDC<,400>蛋白，纯化后检测检测其蛋白活性，证明hNUDC<,400>对巨核细胞的分化和生长具有一定促进的作用。
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