人N-乙酰基转移酶(hARD1)对基因表达影响的蛋白组学分析

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人N-乙酰基转移酶hARD1是与酵母ARD1同源的蛋白质,与NAT1结合形成ARD1-NAT1复合物,具有乙酰基转移酶的活性,从而乙酰化修饰靶分子,参与各种信号传递途经,对肿瘤的形成、发展及细胞的凋亡和自噬发生作用,但是其作用机制仍不清楚。目前已经报道了一些与ARD1相关的基因和蛋白质分子,ARD1与这些基因和蛋白质分子的作用以及功能都有所差异,它既能促进肿瘤的形成和发展,也能抑制肿瘤的发生和发展,ARD1的效应尚处于争论之中。由于ARD1是一个作用比较广泛的乙酰基转移酶,确定hARD1的靶蛋白是研究其功能以及作用机制的关键性环节,而且至今还没有一个完全确定的hARD1的靶蛋白。   本研究运用双向电泳技术分离了Bcap-37细胞中与hARD1表达相关的22个蛋白位点,质谱鉴定出9种蛋白质。经Western blot验证初步确定hARD1对脯氨酰4-羟化酶β亚基(the beta subunit of prolyl4-hydroxylase,P4Hβ)和二核苷酸激酶(NEM1-NEM2)的表达成负相关;而与谷胱甘肽S-转移酶GSTP1的表达成正相关;RT-PCR检测结果显示hARD1对P4Hβ转录水平的影响也是负相关关系;Westernblot检测了不同肿瘤细胞株中的P4Hβ和hARD1蛋白表达水平,发现P4Hβ在Hela、293T、U251和MCF-7细胞株均有表达,尤其在Hela、293T细胞中表达较高,hARD1蛋白在293T细胞中的表达水平最高,且hARD1与P4Hβ呈正相关关系;hARD1过强表达和抑制表达的293T细胞中,hARD1的蛋白水平与P4Hβ蛋白水平成正相关关系,而转录水平的研究结果显示hARD1的RNA水平与P4Hβ的RNA水平也成负相关关系。   上述的研究显示,hARD1对P4Hβ的影响在不同细胞中呈现多样性,在同一细胞中的蛋白水平和转录水平上的影响也呈差异性。那么,Bcap-37细胞中hARD1与P4Hβ之间是怎么样的作用机制,以及293T细胞中hARD1对P4Hβ蛋白的影响是如何调控的,需要继续深入的研究。   本研究为进一步的探索hARD1与其靶蛋白的作用机制,揭示hARD1在细胞增殖、肿瘤的发生、细胞凋亡和自噬中的作用提供了基础。
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