【摘 要】
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青霉素是最早发现的由真菌产生的抗生素药物,也是目前应用最为广泛的药物之一。本文通过保守序列设计引物从灰黄青霉中克隆了含有pex11同源基因的DNA片段,进而通过热不对称交错
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青霉素是最早发现的由真菌产生的抗生素药物,也是目前应用最为广泛的药物之一。本文通过保守序列设计引物从灰黄青霉中克隆了含有pex11同源基因的DNA片段,进而通过热不对称交错PCR(Tail-PCR)扩增得到完整的灰黄青霉Pa-pex11基因。利用根瘤农杆菌介导的遗传转化(ATMT)系统,在灰黄青霉基因组上导入额外的Pa-pex11基因,通过荧光定量PCR(quantitative PCR)对转化子中的Pa-pex11拷贝数进行了相对定量,对灰黄青霉野生型菌株和转化子进行了青霉素发酵及生物活性测定,转化子中青霉素产量较野生型菌株提高了1.7倍。同时通过透射电镜观察了菌体中微体数量的变化,电镜照片显示转化子中微体数量明显增加。上述结果表明通过在基因组中增加Pa-pex11拷贝数能有效地增加灰黄青霉微体的数量,进而提高青霉素的产量。
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