银杏叶提取物对缺氧条件下RPE细胞增殖和迁移的影响

来源 :哈尔滨医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jiangdefeng1983
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目的:研究银杏叶提取物研究银杏叶提取物(extract of ginkgo biloba,EGB)对体外培养缺氧条件下人视网膜色素上皮细胞(human retinal pigmentepithelium cells,HRPECs)增殖、迁移和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的影响,并探讨其作用机制。  方法:对HRPECs传代培养,采用传代的3~5代细胞。观察不同浓度EGB对HRPECs增殖的影响时,实验分为:空白对照组:HRPECs;单纯缺氧对照组:CoCl2(200umol/L)+HRPECs;药物处理组:EGB+CoCl2(200umol/L)+HRPECs,其中药物处理组又根据EGB浓度不同分为4组:5、10、50、100 nmol/L,以上各组均处理72 h;观察EGB作用不同时间对HRPECs增殖的影响时,对照组同上,药物处理组分为24、48、72h,EGB浓度均为100 nmol/L。应用CellCounting Kit-8(CCK-8试剂盒)检测各组OD值,并计算不同浓度、不同时间条件下EGB对HRPECs增殖的抑制率;应用细胞划痕实验方法检测单纯缺氧对照组:CoCl2(200umol/L)+HRPECs;药物处理组:EGB+CoCl2(200umol/L)+HRPECs条件下EGB对HRPECs细胞迁移的影响;应用免疫组化染色的方法检测单纯缺氧对照组:CoCl2(200umol/L)+HRPECs;药物处理组:EGB+CoCl2(200umol/L)+HRPECs条件下EGB对HRPECs细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)因子的表达。  结果:CCK-8试剂盒法检测空白对照组、单纯缺氧对照组和不同浓度EGB组在不同时间对缺氧条件下RPE细胞的增殖抑制率不同,且浓度为100mmol/L的EGB在72h时对缺氧下RPE细胞的增殖抑制率作用最显著,且有统计学意义(P<0.05);随着缺氧时间的延长,RPE细胞的增生能力逐渐增强,在72h时RPE细胞的增生能力最强,并有统计学差异(P<0.05);在细胞划痕实验中结果显示:在EGB在药物作用组时细胞移行和迁移的速度比单纯缺氧对照组时细胞移行迁移速度明显减慢。在细胞免疫组化染色结果中,基质金属蛋白酶-2(MMP-2)因子在单纯缺氧对照组时染色呈强阳性明显表达,在药物作用组,MMP-2的染色呈弱阳性,其表达明显减弱。  结论:银杏叶提取物(EGB)对缺氧条件下体外培养人视网膜色素上皮细胞的增殖和迁移具有抑制作用,这种作用具有剂量和时间的依赖性。EGB具有抑制缺氧条件下体外培养的人视网膜色素上皮细胞MMP-2表达的作用。
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