养成期两个生长阶段斜带石斑鱼对精氨酸最适需要量的研究

来源 :广东海洋大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:yunpiaosifang
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本文以斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)为研究对象,在养成期两个生长阶段(5-10 g、80-100 g)分别进行为期8周和10周的养殖实验。在评估两个生长阶段的斜带石斑鱼精氨酸最适需求量的基础上,探讨不同水平精氨酸的吸收转运机制及其对斜带石斑鱼生长性能、饲料利用、肠道发育、生理生化指标和相关基因表达的影响。主要研究结果如下:1.为了探究精氨酸在斜带石斑鱼的吸收机制,运用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆得到斜带石斑鱼碱性氨基酸转运载体b0,+AT基因(SLC7A9)cDNA的全长序列,并且应用实时荧光定量PCR技术对b0,+AT基因在斜带石斑鱼不同组织中的表达进行检测。结果显示,b0,+AT基因序列全长1808 bp,其中开放阅读框(ORF)为1509 bp,编码502个氨基酸,5’-UTR为80 bp,3’-UTR为219bp,预测其相对分子量为55233.6,理论等电点8.38。多序列比对结果显示斜带石斑鱼b0,+AT基因与其他物种的b0,+AT具有较高的保守性。SMART软件对b0,+AT进行蛋白质序列分析,发现它包含12个跨膜区。实时荧光定量PCR数据分析表明,该b0,+AT基因在斜带石斑鱼心脏、肝脏、脾脏、肾脏、脑、前肠、中肠、后肠和肌肉这9种组织中都有表达,在后肠表达量最高,其次是肾脏。2.为评估斜带石斑鱼养成期两个生长阶段饲料中不同精氨酸水平对其生长、和相关生理指标的影响,配制7种含不同水平精氨酸(2.13%、2.42%、2.71%、2.95%、3.20%、3.48%、3.74%干物质)的等氮、等脂的实验饲料。随机挑选初重分别为7.52±0.02g和80.11±0.03g的健康的斜带石斑鱼分成7组,每组设3重复,幼鱼阶段每重复30尾鱼,中鱼阶段每重复20尾鱼,分别进行为期8周和10周的养殖实验。结果表明:饲料精氨酸水平对两个生长阶段的成活率无显著影响(P>0.05)。增重率(WG)和特定生长率(SGR)均随着饲料精氨酸水平的升高呈先升高后下降的趋势,幼鱼阶段2.95%组显著高于其他各组(P<0.05),中鱼阶段在2.71%组达到最大值,显著高于2.13%和2.42%组(P<0.05)。饲料系数(FCR)幼鱼阶段2.95%组显著低于2.13%、2.42%和2.71%组(P<0.05);中鱼阶段2.13%与3.48%组差异性不显著(P>0.05),显著高于其他组(P<0.05)。蛋白质效率(PER)随着饲料精氨酸水平的升高呈先升高后下降的趋势,幼鱼阶段2.95%组显著高于2.13%、2.42%和3.48%组(P<0.05);中鱼阶段2.71%组显著高于2.13%和3.48%组(P<0.05)。血清中葡萄糖(GLU)幼鱼阶段2.13%和2.42%组显著高于其他各组(P<0.05);中鱼阶段3.48%组显著高于其他各组(P<0.05)。前肠皱襞高度(FH)随着饲料精氨酸水平的升高呈先升高后下降的趋势,幼鱼阶段2.71%和2.95%组显著高于其他各组(P<0.05),中鱼阶段2.71%组与2.95%组差异性不显著(P>0.05),显著高于其他各组(P<0.05)。肌肉中TOR mRNA水平幼鱼阶段2.42%组显著高于其他各组(P<0.05),中鱼阶段3.48%组显著高于2.13%、2.42%和2.71%组(P<0.05)。以特定生长率为判据,通过二次多项式回归分析表明,斜带石斑鱼幼鱼生长阶段对饲料中精氨酸的最适需求量为饲料蛋白的6.07%(饲料的3.06%);经折线模型拟合可得出,斜带石斑鱼中鱼生长阶段对饲料中精氨酸的最适需求量为饲料蛋白的5.40%(饲料的2.72%)。3.饲料中不同精氨酸水平对斜带石斑鱼养成期两个生长阶段血清激素、肝脏和肌肉代谢酶活等相关生理指标及b0,+AT基因表达的影响的结果表明,血清胰岛素(INS)含量随着饲料精氨酸水平的升高呈先升高后下降的趋势,幼鱼阶段2.95%组显著高于其他各组(P<0.05),与3.20%和3.48%组差异性不显著(P>0.05);中鱼阶段在3.20%组达到最大值,与3.48%组差异性不显著(P>0.05)。中鱼血清生长激素(GH)含量随着饲料精氨酸水平的升高呈先升高后下降的趋势,2.95%组与3.20%组差异性不显著(P>0.05),显著高于其他各组(P<0.05)。肝脏精氨酸酶(ARG)活性幼鱼阶段3.48%和3.74%组显著高于2.13%、2.42%和2.71%组(P<0.05);中鱼阶段2.13%组显著低于后4组(P<0.05)。后肠和肾脏中b0,+AT基因表达量随着饲料精氨酸水平的升高呈先升高后下降的趋势,幼鱼阶段2.95%组后肠b0,+AT基因表达量显著高于其他组(P<0.05),2.71%组肾脏b0,+AT基因表达量显著高于其他组(P<0.05);中鱼阶段2.42%组后肠b0,+AT基因表达量显著高于其他组(P<0.05),2.95%组肾脏b0,+AT基因表达量与3.20%组差异性不显著(P>0.05),但显著高于其他组(P<0.05)。4.饲料中不同精氨酸水平对斜带石斑鱼养成期两个生长阶段血清免疫酶活及相关免疫基因表达的影响主要表现为,血清总一氧化氮合酶(TNOS)活性随着饲料精氨酸水平的升高呈先升高后下降的趋势,幼鱼阶段2.95%组显著高于其他各组(P<0.05);中鱼阶段2.71%和3.20%组显著高于2.13%组(P<0.05)。肠道TLR22 mRNA水平随着饲料精氨酸水平的升高呈先升高后下降的趋势,幼鱼阶段2.71%组显著高于其他各组(P<0.05);中鱼阶段2.42%和2.71%组差异性不显著(P>0.05),但是显著高于其他各组(P<0.05)。肾脏MHC-II mRNA水平随着饲料精氨酸水平的升高呈先升高后下降的趋势,幼鱼阶段3.48%组显著高于其他各组(P<0.05),但与2.95%和3.47%组差异性不显著(P>0.05);中鱼阶段2.42%组显著高于其他各组(P<0.05)。肝脏hepcidin mRNA水平幼鱼阶段2.13%组显著高于其他各组(P<0.05),中鱼阶段2.95%组显著高于其他各组(P<0.05)。
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