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目的：
将恒河猴骨髓干细胞高效诱导分化为呈现神经元膜电位水平的胆碱能神经元细胞，为细胞替代治疗提供诱导方案。
方法：
1抽取恒河猴骨髓，密度梯度离心，贴壁培养。
2观察细胞生长形态，细胞计数，绘制细胞生长曲线。
3流式细胞仪检测培养的细胞，检测细胞表明抗原。骨髓干细胞CD分子抗原和血祖细胞细胞CD分子抗原。
4用forskolin和bFGF(basic fibroblast growth factor)加到培养液中，诱导分化。观察细胞形态变化，检测神经干细胞细胞标志。在我们试验中，称之为基础诱导组。
5将forskolin、bFGF和SHH(sonic hedgehog)加到培养液中。观察细胞形态变化，检测细胞表达神经干细胞标志，成熟神经细胞标志，细胞是否分泌神经递质。诱导后检测细胞有无细胞膜电位变化。在我们试验中，将这一组称为SHH诱导组。
6将forskolin、bFGF和RA(retinoic acid)加到培养液中。观察细胞形态变化，检测细胞表达神经干细胞标志，成熟神经细胞标志，细胞是否分泌神经递质。诱导后检测细胞有无细胞膜电位变化。在我们试验中，将这一组称为RA诱导组。
7将forskolin、bFGF、SHH和RA加到培养液中。观察细胞形态变化，检测细胞表达神经干细胞标志，成熟神经细胞标志，细胞是否分泌神经递质。诱导后检测细胞有无细胞膜电位变化。在我们试验中，将这一组称为SHH+RA诱导组。
结果：
1恒河猴骨髓干细胞原代培养形成很多克隆生长。原代细胞生长缓慢，大约需要3天到1周的时间才能形成克隆。传代后，细胞生长显著加快，约3天需要传代。细胞形态长梭型。
2恒河猴骨髓干细胞生长曲线显示，细胞前3天生长迅速，到7天左右到达生长平台期。
3流式细胞检测结果提示，我们所培养的恒河猴骨髓干细胞绝大多数表达骨髓间充值干细胞标志，不表达血祖细胞标志。
4基础诱导组可以使骨髓干细胞呈现神经细胞形态。可以使细胞表达神经干细胞标志，但不表达成熟神经元标志。
5 SHH诱导组使大部分骨髓干细胞呈现神经元细胞形态。诱导后约一半的细胞表达成熟神经元细胞标志，但是无神经递质的表达和细胞膜电位的变化。
6 RA诱导组不但在形态上可以诱导细胞呈现神经元细胞形态。大多数细胞表达成熟神经元标志。诱导后细胞表达乙酰胆碱神经递质。细胞膜电位下降约到神经细胞膜电位水平。
7 SHH+RA诱导组可以使超过90％的细胞呈现神经细胞形态，使细胞表达成熟神经元标志，使更多的细胞表达乙酰胆碱神经递质。使细胞诱导后呈现神经元细胞膜电位水平。
结论：
1.通过我们所用的抽取恒河猴骨髓干细胞密度梯度离心后培养的方法，可以得到高纯度的骨髓干细胞。
2.原代的恒河猴骨髓干细胞是克隆生长的，生长速度较慢。传代后呈梭型，生长速度较快。
3.基础诱导组只能从形态上使细胞呈现神经细胞标志，但不表达神经细胞标志。
4.SHH诱导组使细胞呈现神经细胞形态，表达成熟神经元标志，但不表达神经递质，细胞膜电位变化不明显。
5.RA诱导组使细胞有神经细胞形态，表达神经细胞标志，而且表达乙酰胆碱神经递质，并且可使细胞膜电位下降到神经细胞膜电位水平。
6.SHH+RA诱导组相对于RA诱导组，使更多细胞呈现神经元形态。更多表达乙酰胆碱。是诱导效率最高的组。