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目的: 本研究宗旨是依据miRNAs在14.5天胚龄的小鼠幼红细胞中的表达情况，筛选出在红细胞发育早期有表达差异的miRNAs，研究相应miRNAs对小鼠红细胞发育的影响，并探讨其机制。 方法: 1、通过流式细胞仪(FCM)分选小鼠14.5天胚胎肝的幼红细胞;通过磁珠分选法筛选小鼠胚胎肝的红细胞前体细胞和造血干细胞(FLEPHSCs)并使其在体外分化;利用基因芯片检测miRNAs在14.5天胚胎肝的幼红细胞中的表达差异;利用实时荧光定量PCR(q-RT PCR)技术检测miRNAs在骨髓、外周血、14.5天胚胎肝幼红细胞、FLEPHSCs、红系G1E细胞、MEL细胞中的表达情况; 2、通过T4克隆技术构建miR-709-MSCV-PIG质粒，将质粒用脂质体转染至293T细胞中，包装得到逆转录病毒，然后感染FLEPHSCs和MEL细胞。流式检测Ter119+/CD71+细胞，吉姆萨染色之后进行细胞涂片，检测对红细胞分化的影响;通过细胞计数观察对红细胞增值的影响。 3、通过生物学预测软件TargetScan及miRbase等数据库的查询，预测miR-709的靶基因为GATA-1;构建GATA-1的3非编码区(3untranslated region，3UTR)与pGL-3融合质粒，双荧光素酶报告验证miR-709对其靶基因GATA-1的直接靶向调控作用。 4、q-RTPCR方法检测FLEPHSCs分化过程中miR-709，GATA-1，miR-451的表达情况。通过q-RTPCR方法和Western blotting方法检测FLEPHSCs和MEL细胞在miR-709过表达后靶基因GATA-1 mRNA和蛋白水平的表达变化以及与红系相关的红系标志物的mRNA表达水平。 结果: 1、miR-709在小鼠14.5天胚胎肝的幼红细胞，骨髓有核红细胞，红系G1E细胞，MEL细胞中高表达;在外周血成熟红细胞，骨髓网织红细胞中低表达;在FLEPHSCs中表达先升高后降低。 2、成功构建miR-709-MSCV-PIG逆转录病毒表达质粒，逆转录病毒感染和嘌呤霉素筛选后，Real-time PCR结果显示与空载体对照组比较，miR-709-MSCV-PIG在细胞内得到了高表达。有显著性统计学意义(P＜0.05)。过表达miR-709的红细胞中，成熟红细胞数比对照组明显下降;细胞计数结果显示与空载体相比，细胞数目明显增多。 3、生物学信息提示，小鼠的GATA-13UTR区域与miR-709具有2处绑定位点，双荧光素酶报告实验表明miR-709能绑定GATA-13UTR。 4、在FLEPHSCs细胞中，miR-709表达先升高后降低，GATA-1和miR-451的表达缓慢升高，说明对其在转录后水平上进行负性调节。WT型小鼠的FLEPHSCs细胞中过表达miR-709，导致GATA-1的mRNA和蛋白水平下降。构建的miR-709-MSCV-PIG质粒感染进入红系细胞株后红系相关的红系标志物的mRNA表达水平下降 结论: 在红细胞发育过程中，miR-709的上调抑制了红细胞的成熟，提示其参与了红细胞的发育;GATA-1是miR-709的直接靶基因，miR-709通过靶向调控GATA-1的表达来调节红细胞的发育。进一步表明了miR-709以及与之绑定的GATA-1介入了红细胞的成熟过程，可作为新的分子标靶干预红细胞疾病的治疗及预后。