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研究背景：尽管非酒精性脂肪肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)已成为现代医学研究的热点,但它的发病机制尚未完全阐明。有研究提示,NAFLD与糖尿病两者具有共同的患病基础,NAFLD是代谢综合征(metabolic syndrome,MS)的一个临床特点或在肝脏的表现。美国临床内分泌医师学会已将NAFLD列为MS的主要组分之一。胰岛素抵抗(Insulin Resistance,IR)是2型糖尿病、代谢综合症等代谢相关疾病的主要发病因素,也可能是NAFLD发病中的一个很重要的环节。过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(peroxisome proliferators-activated receptor-γ coactivator-1α,PGC-1α)是近年发现的一种核转录协同激活因子,广泛参与机体的线粒体生物合成、适应性产热、糖原异生、肝糖分解、脂肪酸氧化等多条代谢路径的调节,在维持机体能量代谢平衡中起重要作用,与IR关系密切,被认为在IR及NAFLD的发生过程中起到了关键作用。 研究目的：通过建立NAFLD模型大鼠,观察机体在IR状态下PGC-1α的表达水平的变化,探索PGC-1α的表达失衡所致肝脏细胞能量代谢异常和肝脏线粒体损伤,及其与肝脂肪堆积关系。为研究NAFLD发病机制提供新思路,并为NAFLD的临床治疗提供理论依据。 研究方法：将42只雄性SD大鼠随机分为两组:对照(control,C)组21只,予以普通饲料喂养;高脂饮食(high fat diet,H)组21只,予以高脂饲料(普通饲料84％+猪油14%+胆固醇2%)喂养。分别在第2、4、8周(week,w)末各组随机选取7只大鼠。所有大鼠处死前隔夜禁食并称重,经腹主动脉采血,分离血清,用于测定血清空腹血糖(fasting blood glucose,FBS)、血清胰岛素(fasting insulin,FINS)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase, AST)、甘油三酯(trigly geride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、游离脂肪酸(free fatty acid, FFA),计算空腹胰岛素抵抗指数(fastinginsulin resistance index,FIRI);取出肝脏并称重,计算肝指数;取约100mg肝组织制备10%的肝组织匀浆,用于测定肝匀浆TC、TG、FFA及PGC-1α含量;留取约200g肝组织放入10%福尔马林中固定后,制成切片进行病理学检查;留取0.1cm×0.1cm×0.1cm肝组织1块,用2.5%(体积分数)戊二醛-多聚甲醛混合缓冲固定液(Karno)固定后,制作成电镜标本;留取约50mg肝组织用于RT-PCR半定量方法测定PGC-1αmRNA表达水平。 结果：1、与同期C组相比,H组大鼠体重、肝湿重、肝指数、FINS、AST、TC、肝脏FFA均有所升高,并呈逐渐增高的趋势,在第4w末及第8w末差异均具有统计学意义(P<0.01);血清FIRI、FFA自第2w末即开始显著增加,差异均有统计学意义(P<0.01、P<0.05);FBS在第2w末及4w末同期两组间差异无统计学意义(P>0.05),在第8w末时出现统计学差异(P<0.05)。 2、肝脏病理结果示:H组2w肝细胞胞浆疏松,半数肝细胞出现脂滴;H组4w肝小叶结构紊乱,肝细胞大量脂滴浸润;H组8w肝细胞呈大泡性脂肪变性为主的混合性脂肪变性及气球样变,可见肝细胞坏死及炎细胞浸润。电镜观察示:H组2w肝细胞质中遍布脂滴,部分线粒体嵴轻微破坏;H组4w肝细胞质中遍布脂滴变大,部分线粒体空泡变性;H组8w多数线粒体空泡变性,粗面内质网断裂、扩张。 3、H组大鼠肝脏PGC-1α蛋白含量及mRNA表达量在第4w及8w较同期C组明显增加,差异具有统计学意义(均P<0.01);随喂养时间的延长,H组肝脏PGC-1α呈增高趋势。 4、PGC-1αmRNA表达与反映IR、脂质代谢的各项指标除FBS外均呈显著正相关(P<0.01)。 结论：1、用普通饲料加14%猪油和2%胆固醇持续喂养 SD雄性大鼠8周可成功构建NAFLD模型。 2、在NAFLD的发病过程中,IR和高胰岛素血症起到关键作用。 3、NAFLD中IR的发生可能与肝脏中PGC-1α的增高有关。