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目前,非酒精性脂肪性肝病(Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是全球重要的健康问题之一,也是我国越来越受重视的慢性肝病问题。它是一组由单纯肝脏脂肪变性,发展到脂肪性肝炎(Non-alcoholic steatohepatitis,NASH)、肝硬化、肝癌的临床症候群。近年来随着肠道微生态与NAFLD发病关系研究的深入,肠道菌群过度生长、肠黏膜通透性增加所致的内毒素血症刺激机体炎症反应在NAFLD的发生发展中的作用得到越来越多的认可。布拉氏酵母菌是目前唯一上市的真菌微生态制剂,它为肠道过路菌,在停药一周后粪便中就不可检测到该菌,不会影响肠道内菌量。口服后不受胆汁、胃酸等破坏。它可与致病菌在肠上皮的黏附形成竞争,可以抑制炎症信号的传递表达。我们通过饲以高脂饮食成功造模,研究布拉氏酵母菌对NAFLD大鼠肠黏膜屏障的保护作用,将有助于为NAFLD的治疗及预防提供理论基础。目的:观察布拉氏酵母菌对NAFLD大鼠肠黏膜屏障的保护作用,并对其可能机制进行探讨。方法:实验用雄性健康Sprague-Dawley大鼠36只,体重为180±20g,适应性喂养1周后随机分为三组,即正常对照组(Control组,C组)、高脂模型组(Model组,M组)、高脂治疗组(Treatment组,T组),每组12只;C组饲以基础饲料(其热量为碳水化合物65.5%,蛋白质24.2%,脂肪10.3%)喂养12周;M组和T组饲以高脂饲料(碳水化合物和蛋白质各20.1%,脂肪59.8%)喂养12周;每组各随机处死2只,苏丹黑染色观察肝脏脂质沉积程度确定造模成功。随后T组开始给予布拉氏酵母菌灌胃(75*108 CFU/kg?d-1),C、M组给予等容量的生理盐水灌胃;治疗过程中每周随体重变化调整灌胃量。20周时在麻醉状态下腹主动脉取血处死大鼠,收集血液测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、甘油三酯(TG)、肠型脂肪酸结合蛋白(IFABP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、内毒素水平;观察肝脏的大体情况,称肝脏湿重,采用苏丹黑染色观察肝脏病理变化;肠组织行HE染色观察肠绒毛完整程度,免疫组化染色检测肠黏膜occludin蛋白的表达情况。留取大鼠盲肠内粪便,用于粪便大肠杆菌、拟杆菌定量检测。结果:1大鼠体重(g)、肝重(g)和肝指数(肝重/体重×100%):M组大鼠的体重(548.7±16.1)、肝重(17.516±1.112)、肝指数(3.191±0.170)均明显高于C组的体重(423.2±19.2)、肝重(9.493±0.739)及肝指数(2.241±0.112),差异有统计学意义(P<0.05)。T组体重(499.1±18.1)、肝重(13.062±1.307)和肝指数(2.616±0.230)与M组相比均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。2血清TG(mmol/l)、ALT(u/l)、AST(u/l)水平:M组TG(0.585±0.057)、ALT(78.75±10.92)、AST(205.74±10.05)较C组TG(0.373±0.081)、ALT(30.99±8.59)、AST(108.04±11.60)显著增高,差异有统计学意义(P﹤0.05);T组的AST(194.42±13.74)与M组相比明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);T组TG(0.541±0.072)、ALT(72.36±9.87)与M组相比稍有下降,无统计学差异(P>0.05)。3血清内毒素(EU/ml)及TNF-α(ng/ml)水平:M组内毒素(0.306±0.054)、TNF-α(1.160±0.129)较C组内毒素(0.201±0.047)、TNF-α(0.917±0.115)显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);T组内毒素(0.249±0.026)、TNF-α(1.042±0.078)与M组相比均明显降低,有显著性差异(P<0.05)。4血清IFABP(pg/ml)水平:M组IFABP(288.76±59.17)较C组IFABP(137.19±39.12)明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);T组IFABP(193.02±27.13)与M组相比明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。5组织病理结果:(1)在12周时苏丹黑染色显示M、T组肝细胞脂肪变明显增加,证实造模成功。20周时肝组织苏丹黑染色提示M组肝细胞脂肪变(2.90±0.32)较C组(0.00±0.00)明显增加(P<0.05);治疗后,T组肝细胞脂肪变(1.80±0.79)较M组明显减少(P<0.05)。(2)肠黏膜组织HE染色结果:光镜下,C组肠绒毛排列整齐,结构完整;M组肠绒毛变短、局部有绒毛脱落,排列欠整齐,可见炎性细胞浸润;与M组相比,T组肠绒毛轻度水肿,排列较整齐,炎性细胞浸润较少。6免疫组织化学结果:M组的肠黏膜occludin蛋白(0.042±0.006)较C组(0.177±0.007)明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);T组(0.049±0.010)较M组表达稍有增加,但无统计学意义(P>0.05)。7粪便PCR结果(log10(CFU/g)):(1)M组的大肠杆菌(E.Coli)数量(5.98±0.08)较C组(4.00±0.09)明显增加,差异有统计学意义(P<0.05),与M组相比,T组大肠杆菌数量(4.92±0.09)明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)M组的拟杆菌数量(8.04±0.17)较C组(9.47±0.09)明显减少,差异有统计学意义(P<0.05),与M组相比,T组的拟杆菌数量(8.89±0.10)明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1高脂饮食可成功诱导大鼠NAFLD,经布拉氏酵母菌干预可以起到减轻体重和改善肝细胞脂肪变的作用。2布拉氏酵母菌能通过减轻NAFLD大鼠内毒素血症,减轻机体炎症反应。3布拉氏酵母菌能调节NAFLD大鼠肠道大肠杆菌和拟杆菌的比例。