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近来发现,动脉粥样硬化(AS)斑块中有神经鞘磷脂(SM)的聚集,血浆SM水平是致AS发生的独立危险因子,载脂蛋白E基因敲除(ApoE KO)小鼠血清中的SM水平是野生型老鼠的4倍;抑制ApoE KO小鼠的SM合成可以明显抑制AS的发生;Brand等利用新型的鼠单克隆抗体α-P65mAb首次证实了AS病变组织中有活化形式的核因子κB(NFκB)的存在,其水平明显高于正常组织,并且认为AS可能是NFκB介导的慢性炎症病例的一个典型范例。Luberto et al研究发现,神经鞘磷脂合成酶(SMS)的药理学抑制剂(D609)阻断了肿瘤坏死因子(TNFα)或内毒素诱导的NFκB的活化。这些研究显示,SM在AS的发生中起着非常重要的作用,抑制SM的合成可能会影响到NFκB的活化,进而影响到AS的发生。为了研究SM和AS的关系,本实验室从美国纽约州立大学动物实验中心引进的SMS2基因敲除杂合子【SMS2(+/-)】小鼠3只(雄性一只,雌性两只)为种鼠,利用PCR方法鉴定培育出的SMS2(-/-)小鼠为模型,探讨SM引起AS发生的原理和机制,从而为临床治疗和和预防提供理论依据。目的:研究AS的发生与SM代谢之间的关系,探讨SM引起AS的发生机制和原理,从而为AS的临床治疗和预防提供理论依据。方法:利用从美国纽约州立大学动物实验中心引进的3只SMS2(+/-)小鼠(雄性一只,雌性两只,背景为C57BL/6J小鼠)为种鼠,采用杂交、回交、互交的方法进行繁殖,用酚氯仿提取法提取小鼠基因组DNA, PCR扩增目的基因,琼脂糖凝胶电泳对小鼠基因型做出鉴定,获得雄性和雌性SMS2纯合子(-/-)小鼠,按照同样方法进行繁殖;以SMS2(-/-)小鼠为研究对象,野生型(WT)小鼠为对照组,从3月龄起开始喂养高脂饮食,每天每只7g,喂养3个月,每隔一个星期测量体重;解剖SMS2(-/-)小鼠和野生型小鼠主动脉弓和胸腹主动脉,观察AS斑块情况,进行比较,利用血脂检测试剂盒和酶学方法检测血脂水平和血清SM含量;内毒素诱导小鼠腹腔巨噬细胞的形成,用RPMI-1640培养液在无菌条件下进行培养;利用Western Blotting的方法检测巨噬细胞内NFκB的水平;采用成组t检验的统计学方法对数据进行分析。结果:经过高脂高胆固醇饮食后,对照组小鼠主动脉弓和胸腹主动脉产生了大量的AS斑块;而SMS2(-/-)小鼠AS斑块面积明显减小;SMS2(-/-)小鼠与WT小鼠相比,体重明显减轻,变化有显著差异(p<0.05);经检测,正常饮食情况下,实验组小鼠与对照组小鼠相比, SM水平明显降低,变化有显著差异(p<0.05),而甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平变化均无差异(p>0.05);高脂高胆固醇饮食后,实验组小鼠与对照组小鼠相比, SM水平明显降低,变化有显著差异(p<0.05),而甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平变化均无差异(p>0.05);经Western Bloting检测,实验组小鼠巨噬细胞内NFκB活性明显降低,而对照组小鼠NFκB活性很高。结论:1、成功繁育出基因敲除动物模型:培育的SMS2(-/-)小鼠可作为研究AS的理想的动物模型。2、SMS2基因缺失使血清SM水平明显下降,由于SMS是SM合成中的最后一个酶,那么SMS2可能是血清SM含量的决定因素之一。3、SMS2(-/-)小鼠与WT小鼠相比,主动脉弓和胸腹主动脉AS斑块面积明显减小,这说明SMS2可能是AS治疗新的靶点。4、高脂高胆固醇饲养后,SMS2(-/-)小鼠与WT小鼠相比,体重较轻,这说明SMS2基因缺失可以控制肥胖。5、高脂高胆固醇饲养后,SMS2(-/-)小鼠与WT小鼠相比,腹腔巨噬细胞NFκB活性降低,由于NFκB是调节炎症反应的重要因子,那么SMS2可能是炎症反应的重要调节因素。