【摘 要】
：
本研究利用piggybac转座子为载体将嗜热菌糖苷酶(LacS)基因整合到牛成纤维细胞的基因组中，并分析了piggybac转座子在牛成纤维细胞中的转座效率和转座位点的特性。同时，在研究中
论文部分内容阅读
本研究利用piggybac转座子为载体将嗜热菌糖苷酶(LacS)基因整合到牛成纤维细胞的基因组中，并分析了piggybac转座子在牛成纤维细胞中的转座效率和转座位点的特性。同时，在研究中探讨了转座子和转座酶二元载体转染牛成纤维细胞时的最佳比例。 1．从Puc57载体上克隆的LacS和BLG表达框与从pZGL载体上克隆到的ZGL表达框相连，并且扩增ZGL表达框时设计的上游引物中引入NotⅠ、AflⅡ、NheⅠ酶切位点，下游引物引入SalⅠ、HindⅢ酶切位点，两个表达框经酶切连接后得到质粒pZGL-LacS，测序鉴定。 2．通过PCR从pLOX-EGFP上克隆PGK-NEO片段，并在设计引物时在上游引物5’端引入NheⅠ酶切位点，下游引物3’端加2A和BamHⅠ，然后用NheI，BamHI酶切将得到的片段连接到pEGPF-N1载体中，新构建的质粒记为pEGFP-NEO-N1，再从此质粒上克隆PGK-NEO-EGFP表达框，然后用NheⅠ和AflⅡ双酶切，连接到已经构建好的载体pZGL-LacS中，测序鉴定。 3．将转座子和转座酶载体以5：1的比例转染牛成纤维细胞。然后将转基因细胞分别以1：30,1:60,1:100三个梯度稀释传代，筛选单克隆细胞，培养液内G418的浓度为600ug/ml。在这三种不同的稀释浓度下分析添加和不添加转座酶对细胞单克隆形成的影响。考马斯亮蓝染色后得到的结果为不添加转座酶的的组没有能形成单克隆，与添加了转座酶的组差别极显著。 4．为了找到转座子与转座酶的最佳比例，将转座子转座酶的比例梯度设为10:1,5:1,2:1,1:2,1:5,1:10，细胞传代比例设定为1:60，结果在不同的比例下形成的单克隆数也有所不同。 5．通过热不对称交错PCR（TailPCR）进行转座子插入位点的检测，结果表明在载体规律性插入位点为TTAA序列，在牛基因组中除外显子区外，其中内含子区、基因间序列区、重复序列区均检测到插入位点。
其他文献
本文针对红外辐射涂料在高温下易从不锈钢基材表面脱落，抗热震性能差的问题，制备一种适用于不锈钢材料的红外辐射涂料，提高涂料的抗热震性能，节能的同时对不锈钢体起到抗氧化保护
对多伦县造林10年和造林30年的樟子松人工林、禁牧10年草地以及多年连作马铃薯农田的土壤有机碳密度，及其植被生长情况、生物量、土壤有机碳、全氮、容重、粒径组成和土壤有机
译林版《牛津初中英语》每个单元Speak up 板块将语言结构和交际功能结合在一起,为提高学生口头交际能力提供了相关的语言材料.本文首先结合该板块的特点,提出从“情境”与“
微观过程的检测一直是实验研究的难点,也是蛋白质构象转换研究的制约因素,目前很难通过实验技术获得蛋白质构象转换过程的直接描述。利用分子动力学模拟[1]蛋白质与材料
目的：神经肽广泛存在于从线虫到人各种生物门类中，是结构和功能最为多样的信号分子之一，也是近年来内分泌研究中进展较快的领域。短神经肽F(sNPF)是昆虫神经肽中的一大类，由6-11
近十几年来,如何提高锂硫电池的循环性能一直是电池领域的研究热点,将聚合物作为添加剂加入到各种C/S 体系中来抑制“穿梭效应”已经被证明是一条可行的路径.该方法的主
The diffusions of nitrobenzene(PhNO2)in the three kinds of ionic liquids(ILs),i.e.1-ethyl-3-methylimidazolium hexafluorophosphate([Emim][PF6]),1-butyl-3-met
A computational study by combining molecular dynamics simulations with density functional theory calculations has been conducted on two unnatural octapeptid
头索动物文昌鱼进化地位特殊，具有脊索动物门祖先的原始特征，是进行脊椎动物起源和演化、胚胎发育和比较基因组学研究的重要材料，具有重要的科研价值，同时文昌鱼还是一种有养殖前
金属纳米团簇作为一种重要的纳米团簇种类,因金属本身具有的良好催化性质,而被誉为“第四代催化剂”,并且一直是人们研究的焦点。目前,用实验的手段探讨多金属团簇的结构性质和热稳定性能有一定的困难。因为许多复杂的因素,如尺寸、组成和原子顺序等用实验方法难以测量,难以实现精细化的调控,所以一定的模拟计算的方法是必须也是必要的。本论文主要是利用Monte Carlo以及分子动力学模拟方法,在理论上探究了多金属