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目的：
1．应用基因工程技术，以AFP启动子和增强子的组合片段作为基因转录调控序列，通过定向克隆构建肝细胞癌特异性铜绿假单胞菌外毒素PE38基因真核表达载体，并通过生物信息学分析及预测所表达蛋白的理化性质和结构特征。
2．检测PE38基因真核表达载体体外靶向抗肝细胞癌作用，为肝细胞癌特异性基因治疗探索新的方法。
方法：
1．以质粒pRB391为模板，PCR法扩增出PE38基因并添加限制性酶切位点，电泳鉴定。
2．将含有AFP启动子和增强子组合片段的真核表达载体pAFP与目的基因双酶切后并进行连接，构建重组质粒pAFP-PE38，并经酶切及测序鉴定。
3．对重组质粒pAFP-PE38的序列进行开放读码框分析，以ProtParam方案以及Protean程序对蛋白的理化性质进行分析，并将重组质粒所表达的PE38蛋白与GenBank中PE38蛋白进行二级结构、柔性、亲水性、抗原性、表位对比。
4．将重组质粒pAFP-PE38以脂质体介导转染入细胞内，以RT-PCR法检测细胞中PE38mRNA的表达，CCK-8法检测细胞毒性作用并观察细胞形态学变化。
结果：
1．PE38基因克隆成功，电泳片段大小与预期相符。
2．构建的PE38基因真核表达载体pAFP-PE38经酶切、测序证明构建正确。
3．生物信息学分析证实，重组质粒pAFP-PE38所表达的目的蛋白，在二级结构上没有变化，亲水性、柔性、抗原性等生物学活性未发生改变，亦没有新的表位出现。
4．AFP阳性HepG2细胞、AFP阴性HeLa细胞及AFP阴性L-O2细胞转染质粒pAFP-PE38后观测到：
(1)HepG2细胞转染24h后仍正常生长，至48h部分细胞开始变圆、悬浮皱缩，至72h悬浮细胞增多，胞质中可见粗大颗粒和空泡；而HeLa细胞和L-O2细胞转染质粒后仍然排列整齐，继续生长。
(2)各组细胞转染质粒24h、48h和72h后，仅HepG2细胞有PE38mRNA表达，而HeLa细胞和L-O2细胞均无PE38mRNA表达。
(3)HepG2细胞转染48h后，与阴性对照组相比细胞生长显著受抑(P＜0.01)，24h、48h和72h时生长抑制率分别为5.8％、27.2％和58.3％，抑制作用随转染时间的延长而增强；而HeLa细胞和L-O2细胞的生长均未受明显影响（P＞0.05）。
结论：
1．通过定向克隆成功构建了肝细胞癌靶向性PE38基因真核表达载体pAFP-PE38。
2．重组质粒pAFP-PE38设计合理，其所表达的目的蛋白很大程度保留了PE38蛋白的生物学活性。
3．AFP基因顺式作用元件可调控下游PE38目的基因特异表达于AFP阳性HepG2细胞。
4．PE38毒性基因对AFP阳性HepG2细胞具有靶向性杀伤作用，选择性抑制其生长。