【摘 要】
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该实验研究了(1)发根农杆菌的生理生化、分子生物学鉴定及生物检测和活力比较;(2)发根农杆菌介导的蓝猪耳遗传转化和蓝猪耳毛状根的植株再生,为蓝猪耳的遗传转化和其它分子生
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该实验研究了(1)发根农杆菌的生理生化、分子生物学鉴定及生物检测和活力比较;(2)发根农杆菌介导的蓝猪耳遗传转化和蓝猪耳毛状根的植株再生,为蓝猪耳的遗传转化和其它分子生物学研究奠定基础.采用3-酮乳糖产物法、差异酸生成实验和游动性实验鉴定6种发根农杆菌供试菌株A4、R1205、R1000、R1601、R1022和15834.通过不同培养时间下菌液的浓度测定表明,所有测试菌株均在16-32h时呈现对数生长,培养32 h时的菌液浓度为R1000>R1205>R1601>R1022>A4>15834,但培养40 h时A4菌液浓度达到最大.利用PCR方法鉴定结果表明,所有供试菌株中,A4、R1205、R1000和R1601为含Ri质粒的发根农杆菌,而R1022和15834未出现阳性结果.利用黄瓜作为菌株遗传转化率鉴定的模式系统来研究A4,R1205,Ri000,R1601活力,R1000、R1205、R1601和A4转化蓝猪耳形成的根PCR和Southernblot检测表明,除R1205转化形成的根的一个克隆外,所有的毛状根克隆都呈现PCR阳性.在PCR检测阳性的克隆中,随机挑选2个做Southern blot,结果均呈阳性.不同菌株对蓝猪耳的遗传转化能力不同,R1000和A4明显高于R1205和R1601.蓝猪耳遗传转化的最适菌液OD<,600>值为1.0(6×10<7>个细菌/ml).2~3天共培养有利于蓝猪耳的遗传转化,10~30.M外源乙酰丁香酮能有效地提高毛状根的形成率,但是在高于40.M时,转化率不能显著提高.4 mg/l以下的硝酸银便能有效地提高遗传转化率,但高剂量(10 mg/l)时作用却相反.经Km筛选的蓝猪耳毛状根扩大培养7天后切下转入诱芽和诱导愈伤组织培养基中,3周后没有发现愈伤组织形成.
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