羟基红花黄色素A抑制急性肺损伤相关的内皮细胞炎症信号跨膜转导作用的研究

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目的:  羟基红花黄色素A(HydroxysafflorYellowA,HSYA)是中药红花的主要有效成分,本研究以观察羟基红花黄色素A抑制脂多糖诱发的Eahy926细胞脂多糖受体TLR4和促炎症因子VCAM-1、ICAM-1、TNFα、IL-6、IL-1β表达升高的作用,探讨羟基红花黄色素A缓解急性肺损伤的作用及其机制,为羟基红花黄色素A缓解肺部炎症反应的应用提供依据。  方法:  从红花生药中提取单体羟基红花黄色素A,进行结构鉴定及纯度分析,并以脐静脉血管内皮细胞株(Eahy926)细胞作为研究对象,分为对照、脂多糖、脂多糖+HSYA(20μmol·L-1、10μmol·L-1、5μmol·L-1)5个实验组(n=3),RT-qPCR法检测细胞上清液TLR4、TNFα、ICAM-1、VCAM-1、IL-6和IL-1βmRNA的表达;ELISA法检测ICAM-1、VCAM-1、IL-6、IL-1β和TNFα的表达;westernblot法检测细胞TLR4的表达;流式细胞术观察FITC-LPS与Eahy926细胞受体结合作用以及加入HSYA后的抑制作用,HPLC-MC检测HSYA进入细胞的情况。  结果:  从红花生药中提取的单体经过结构鉴定是羟基红花黄色素A,其纯度为95%。药理实验结果显示,与正常对照组相比,LPS模型组的Eahy926细胞TLR4、ICAM-1、VCAM-1、TNFα、IL-1β及IL-6mRNA和蛋白表达水平明显升高,HSYA能抑制这些炎症因子及TLR4受体的mRNA和蛋白的表达,且随着HSYA剂量增加抑制作用更加明显。流式细胞术观察HSYA可以明显抑制FITC标记的LPS与内皮细胞受体的结合,并且随HSYA剂量增加抑制作用更加明显。HPLC-MC检测出进入细胞的HSYA量不到4%。  结论:  HSYA可以在体外实验中抑制LPS所致Eahy926细胞炎症因子及TLR4受体mRNA和蛋白表达的升高,经检测HSYA进入细胞极少且该药能抑制LPS与内皮细胞受体的结合,因此我们推测肺组织的细胞膜为HSYA的主要作用部位,HSYA可与细胞膜上的TLR4受体作用而发挥药效,影响病理条件下的细胞信号转导与有关的基因表达,改善细胞功能而缓解肺部的损伤。
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