基于网络药理学的补肾健脾方及拆方治疗肝癌和大肠癌的分子机制研究

来源 :上海中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ligang_nc2
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研究目的:探讨补肾健脾方及其拆方六味地黄汤、四君子汤治疗肝癌和大肠癌异病同治的分子机制  研究方法:①利用网络药理学技术构建补肾健脾方及其拆方的中药成分-靶标-疾病网络,对网络进行分析筛选关键成分及靶标,并构建补肾健脾方治疗肿瘤的中药成分-靶标-通路网络,筛选补肾健脾方治疗肝癌、肠癌关键成分及靶标;②体外实验采用人肝癌HepG2细胞及人结肠癌SW620细胞,MTS法检测补肾健脾方、四君子汤、六味地黄汤含药血清及关键成分对细胞活力的影响;Western blot法检测药物对药物对预测关键靶标蛋白表达的影响。  研究结果:(1)利用相关数据库收集整理补肾健脾方及其拆方进行补肾健脾汤成分化合物的,共筛选出143种成分,其中四君子汤成分101种,六味地黄汤成分29种,二者交集成分13种。对拓扑数据分析预测补肾健脾方关键成分槲皮素、山奈酚、β-谷甾醇、豆甾醇、常春藤皂苷元、刺芒柄花素、柚皮素、异鼠李素、甘草查尔酮a和泽泻醇b通过调控PI3K-Akt信号通路和MAPK/ERK信号通路抑制肝癌和肠癌细胞增殖并促进细胞凋亡。(2)利用MTS法检测补肾健脾方及拆方对HepG2细胞和SW620细胞活力影响,发现10%的含药血清24h即对这两种细胞增殖有抑制作用,而补肾健脾方关键成分中甘草查尔酮a(60、70、80μ mol/ml)、泽泻醇b(20、30、40μ mol/ml)、常春藤皂苷元(60、70、80μ mol/ml)对HepG2细胞增殖抑制,而泽泻醇b(5、10、20μ mol/ml)、甘草查尔酮a(60、70、80μmol/ml)对SW620细胞增殖抑制。(3)利用Western blot法检测补肾健脾方及拆方对HepG2细胞和SW620细胞PI3K/Akt信号通路和MAPK/ERK信号通路上关键靶标的影响,结果发现六味地黄汤可促进HepG2细胞和SW620细胞BCLXL蛋白的表达,抑制MMP2蛋白的表达,而四君子汤可促进HepG2细胞和SW620细胞P53蛋白的表达、抑制MMP2和PCNA蛋白的表达,而作为合方的补肾健脾方则抑制Akt1和MMP2蛋白的表达,且其抑制作用强于拆方;而通过对HepG2细胞和SW620细胞PI3K/Akt信号通路和MAPK/ERK信号通路关键成分作用细胞蛋白表达检测结果,我们发现:泽泻醇b抑制Akt1和MMP2的表达,促进P38的表达;而甘草查尔酮a促进CASP9、P38和BCLXL的表达,抑制Akt1的表达。而常春藤皂苷元对HepG2细胞蛋白的表达主要是促进PTEN、CASP9、P53、MMP2、P38、PCNA和MMP2的表达,抑制Akt1和CDK2的表达。  结论:补肾健脾方及其拆方通过复杂分子网络对相关蛋白进行调控,从而对疾病起到治疗作用。四君子汤、六味地黄汤、补肾健脾方之间既有交集成分和靶标,又各自有其独特的成分作用在其单独的靶标上,三方通过对这些成分对不同靶标进行调控,产生协同作用,从而治疗疾病。补肾健脾方及其拆方对肝癌HepG2细胞和肠癌SW620的同一通路PI3K/Akt通路的关键蛋白起作用从而抑制肿瘤细胞的生长,产生异病同治的治疗效果。通过方剂的配伍,增强二方对同一靶标的作用,并且能产生新的作用,因此中药方剂的配伍能产生协同作用,从而提高疗效。
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