鸡源里默氏菌属新种的分离鉴定及流行分布调查

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里默氏菌属是威克斯菌科下的一个重要属,该属中已知的种有鸭疫里默氏菌、鸽里默氏菌和鸽咽喉里默氏菌,鸭疫里默氏菌作为该属的模式种,对水禽养殖业造成严重危害。该属新种的发现对于扩充里默氏菌属的物种类型、同属其他种耐药机制的研究具有重要意义,对潜在新发病原的防控也具有重要价值。为此本研究从2020年~2022年采集检测全国各地送检的病料样本进行细菌分离鉴定,以分离的里默氏菌属未知种为研究对象通过多相分类学方法确定其新种的分类地位,并对其耐药性以及毒力进行初步探究,结合针对该菌种的流行分布调查,对其在我国的流行情况进行了统计分析。试验于采样自四川省某规模化养鸡场的鸡咽拭子样品中分离到33株里默氏菌属的未知种。以分离株RCAD1363作为研究对象,对其形态结构、培养特性、运动性、生化反应特征、醌组分和极性脂、耐药性等表型进行了探究,表明该菌为无运动性、无荚膜的短杆状革兰阴性菌。醌组分为甲基萘醌:MK-6(100%),极性脂由磷脂酰乙醇胺、未知氨磷脂、未知氨基脂以及8种未知脂质构成。药敏试验结果表明该菌对氨基糖苷类抗生素以及多黏菌素B耐药。人工感染实验结果表明该菌对鸡致病力弱,不致死。通过对RCAD1363基因组生物信息学分析,结果显示其基因组全长1.9 Mb,G+C%含量为36.30%,注释结果显示有1852个CDS区域,3种r RNA,36个t RNA、1种tm RNA,具有tet(Q)、Ran B及erm F三种耐药基因,16S r DNA及全基因组构建的系统发育树表明该菌与里默氏菌属的菌种聚类在同一分支。与24株近缘物种菌株的d DDH值分布在18.1%~29.3%范围内,ANI值分布在69.83%~75.52%。与亲缘关系最近的鸭疫里默氏菌、鸽里默氏菌、鸽咽喉里默氏菌Ortho ANIu值的范围为71.65%~74.19%。以上数据均在种的分类阈值以下,结合形态结构和理化特性等表型,表明RCAD1363为里默氏菌属的新种并命名为Riemerella gallipalatumis sp.nov.。通过对2020年~2022年全国Riemerella gallipalatumis sp.nov.流行情况的调查,将送检的病料样本进行细菌的分离鉴定并统计分析,共处理组织样本155份,组织分离的待鉴定细菌80株,咽拭子样品290份。处理的290份咽拭子样品中,共分离鉴定细菌133株,仅在2021年四川省某规模化养鸡场的鸡咽拭子样品中分离到32株与RCAD1363疑似同种的细菌。通过16S r DNA比对结合生化反应特征确定了其中有30株为Riemerella gallipalatumis sp.nov.。以上结果表明Riemerella gallipalatumis sp.nov.目前只在2021年的四川省发现,且仅存在于鸡的口咽部。
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