论文部分内容阅读
第一部分:多发性骨髓瘤血清差异蛋白质研究 实验目的:用LC/MS/MS的方法分析多发性骨髓瘤患者血清和正常人血清中的蛋白质，期望找到两组间的差异蛋白质，为改善临床诊断方法提供参考和依据，并且对多发性骨髓瘤的部分病理过程做出合理的解释。 实验方法:收集8例正常人和8例MM初诊患者血清，应用gold nanoparticles(GNPs)富集血清中的低丰度蛋白质，用1DE联合LC/MS/MS的方法对低丰度蛋白质进行分析和鉴定。利用SEQUET软件对血清中的蛋白质进行比较，选取有2倍以上差异的蛋白质作为差异蛋白质。用Western blot对部分差异蛋白质进行验证，利用DAVID网站对蛋白质进行功能上的分类和分析。 实验结果:通过两组比较在MM患者血清中共发现22个差异蛋白质。其中表达上调的蛋白质为12个，表达下调的蛋白质为10个。上调的有:serum amyloid A2 isoform a, Complement factor H-related 5, Plasma serine protease inhibitor, Angiogenin, Isoform HMW of Kininogen-1, insulin-like growth factor-binding protein 2 precursor, Serum amyloid A protein, Isoform 1 of Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H4, Plasma kallikrein, Transcription factor SOX-11 , Isoform 7 ofNesprin-2, Hornerin; 下调的有:Apolipoprotein A-I, Apolipoprotein B-100, Isoform 1 of Complement factor H, Isoform 1 of NEDD4-binding protein 2-like 1, Protease serine 3,Isoform 1 of Alpha-1-antitrypsin, Isoform 1 of Multimerin-1 (MMRN1) , Isoform Short of Complement factor H-related protein 2, Integrin alpha-11 (ITGA11)，vitamin D-binding protein isoform 1 precursor。对候选蛋白质中的multimerin1（MMRN1）进行Western blot验证后，其结果与质谱结果一致。差异蛋白质中的一部分已在一些癌症中有过相关报道，并且与癌症的发生和诊断等相关。 结论:对正常人血清与患者血清进行比较之后发现两组之间存在22种差异蛋白质。对这些差异蛋白质的进一步研究将有助于改善多发性骨髓瘤的临床诊断方法，能够更好的对疾病的病理过程做出一定的合理解释。 第二部分:多发性骨髓瘤血清差异小分子代谢物质研究 实验目的:用LC/MS/MS的方法探讨多发性骨髓瘤患者血清中存在的差异小分子代谢物质，期望找到与疾病相关的标志物，对改进临床诊断方法提供依据和补充，与第一部分互相联系，进一步解释患者脂类代谢异常的原因。 实验方法:通过对6例正常与6例MM患者的血清分别混合，各取100ul分别与90ul乙腈进行混合，离心后去除沉淀，留取上清进行LC/MS/MS质谱分析，筛选出有差异的m/z，并且在代谢组学的分析网站METLIN上进行分析，从而鉴定出差异小分子代谢物质。 实验结果:在对比两组之后，差异小分子代谢物质中发现了几类物质:(1)药物的水解产物:如Betaine（甜菜碱），isoamylnitrite（亚硝酸异戊酯），Kanosamin（卡那霉素水解物）;(2)胆汁酸代谢相关有机酸:1α，3α-Dihydroxy-5β-cholan-24-oic Acid（1α，3α-二羟基-5β-去氧胆酸），Chenodeoxycholic Acid（鹅脱氧胆酸），Deoxycholic acid（脱氧胆汁酸），3b，12b-Dihydroxy-5b-cholanoic acid（类固醇有机酸的一种，存在于胆汁中的初级胆汁酸）。 结论:在本实验的小分子代谢物质的研究中，没有发现比较特异的小分子物质。但是，此次试验可作为对MM代谢组学的初步研究的尝试。可以为以后的MM代谢组学实验提供参考，为优化实验提供证据。