【摘 要】
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目的:1.探讨结核分枝杆菌H37Ra与有机硒联合免疫小鼠后,细菌在小鼠体内定植的情况,以及诱导机体产生的特异性细胞免疫功能。2.构建可表达结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B的靶细胞,
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目的:1.探讨结核分枝杆菌H37Ra与有机硒联合免疫小鼠后,细菌在小鼠体内定植的情况,以及诱导机体产生的特异性细胞免疫功能。2.构建可表达结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B的靶细胞,并研究结核分枝杆菌H37Ra与有机硒联合免疫小鼠后的特异性细胞毒作用及其免疫机制。方法:1.将C57BL/6小鼠分为6组(每组12只),即⑴H37Ra+Se组、⑵BCG+Se组、⑶H37Ra组、⑷BCG组、⑸Se组和⑹PBS对照组。小鼠连续灌服有机硒1周后,采用皮内注射方式接种H37Ra或BCG,然后继续喂硒4周。免疫4周和8周后,检测小鼠脏器指数及结核杆菌在脏器内的定植情况。2.分离各组小鼠脾淋巴细胞,体外用PPD刺激,MTT法检测脾淋巴细胞的刺激指数(Stimulation Index,SI);ELISA法检测培养上清液中IFN-γ、IL-2的产量。3.构建可表达结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B的靶细胞,MTT法检测免疫小鼠脾淋巴细胞的杀伤活性。4.免疫8周后,RT-PCR法检测脾淋巴细胞中穿孔素、颗粒酶B mRNA的表达。结果:1.免疫4周或8周后,H37Ra+Se组的脾指数、胸腺指数和脾肺荷菌量略高于BCG+Se组、H37Ra组,但差异无显著性(P>0.05)。2. H37Ra+Se组的SI、IL-2和IFN-γ均显著高于H37Ra组(P<0.05),但与BCG+Se组相比,IFN-γ有显著性差异,其他指标无显著性差异(P>0.05);随着时间的延长,各项指标均下降。3.转染阳性细胞中有结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B的表达,H37Ra+Se组脾淋巴细胞的杀伤活性显著高于H37Ra组(P<0.05),略高于BCG+Se组(P>0.05)。4. H37Ra+Se组小鼠穿孔素及颗粒酶B mRNA的表达量均显著高于PBS组(P<0.05),略高于BCG+Se组(P>0.05);H37Ra+Se组与H37Ra组比较,穿孔素mRNA的表达量有显著性差异(P<0.05),而颗粒酶B mRNA的表达量,前者略多于后者,但无统计学意义(P>0.05)。结论:1. H37Ra和有机硒联合免疫小鼠后结核菌能在小鼠脾脏、肺脏定植至少60天。2. H37Ra和有机硒联合免疫小鼠后诱导机体产生的细胞免疫效果显著优于H37Ra或BCG单独免疫,略优于BCG和有机硒联合免疫。3.构建表达结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B的靶细胞及MTT法检测特异性杀伤活性,为研究结核疫苗免疫的细胞毒作用提供了较好的研究手段。4. H37Ra和有机硒联合免疫小鼠后可以诱导脾淋巴细胞的杀伤活性,其杀伤机制可能与细胞中穿孔素、颗粒酶B mRNA表达增加有关。
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